维生素A含量测定 测定维生素A含量的两种办法比较
黄成安 张喜金 李斌
[摘要] 意图 通过比较测定维生素A含量的两种不同办法，为维生素A及其制剂的含量测定供给参阅，然后树立一种快速、准确、简略的检测办法。 办法 均选用高效液相色谱法测定，沸水浴回流皂化法选用甲醇-水（94∶6）为活动相，检测波长为300nm，色谱柱温度为40℃；加热超声法选用甲醇-水（98∶2）为活动相，检测波长为325nm，色谱柱温度为40℃。 成果 通过检测，两种办法所得出的含量相差较小，相对误差均在1.0%之内。 定论 两种测定办法均科学有用，能对汤臣倍健维生素A维生素D软胶囊（儿童型）中维生素A的含量起到质量操控的意图。办法2更为方便简略，溶剂运用量少，可以节约查验本钱，进步人员利用率。
[关键词] 高效液相色谱法；维生素A；办法比较
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）01-103-04
[Abstract] Objective Through the comparison of two different methods for the determination of vitamin A content，provides the reference for the content determination of vitamin A and its preparation，and to establish a rapid，accurate，simple detection method. Methods All by HPLC，using methanol water boiling water bath reflux saponification method （94：6） as mobile phase，the detection wavelength was 300nm，column temperature was 40℃；using methanol water heating and ultrasonic method （98：2） as mobile phase，the detection wavelength was 325nm，column temperature was 40℃. Results By detecting the content of two kinds of methods，the less difference，relative error is within 1%. Conclusion Two analysis methods are scientific and effective，vitamin A vitamin D soft capsules（for children） content of vitamin A to the purpose of quality control. Methods 2 is more simple，less solvent consumption，can save the test cost，improve the utilization rate.
[Key words] HPLC；Vitamin A；Comparison of methods
维生素A（图1）可促进视觉细胞内感光色素的构成，调试眼睛习惯外界光线强弱的才能，以下降夜盲症和视力减退的发作，保持正常的视觉反响。而维生素A摄入过量也会引起副效果，可危害脑安排等，因而维生素A制剂含量的操控十分重要[1-3]。因为维生素A的不稳定性，放置不妥或放置时刻过长均易导致其蜕变，故挑选一种方便简略、成果牢靠、专特点强、灵敏度高、本钱低价的测定办法，显得尤为重要[4-5]。
维生素A在分类中归于脂溶性维生素，可以调理人体的多种生理机能，增强机体免疫才能，在调理体内各方面的代谢及促进骨骼的生长发育上有着极其重要的效果，一起它也参加视网膜视紫质的组成与再生，保持正常视觉[6-7]。维生素A首要存在于动物肝脏、血液和眼球的视网膜中，又名视黄醇。为黄至带赤色的橙黄色液体，冷冻后可固化，有异臭，耐光和耐氧性弱，易被脂肪氧化酶分化[8-9]。不溶于水和甘油，混溶于氯仿、乙醚和脂肪。
1 仪器、对照品与试剂
维生素A醋酸酯对照品（DR，30112，纯度：98.8%）；维生素A视黄醇对照品（SIGMA，BCBG2044V，纯度：98%）；甲醇（AR级）；95%乙醇（AR级）；乙醚（AR级）；氢氧化钾（AR级）；抗坏血酸（AR级）；甲醇（HPLC级）；蒸馏水。
超声波清洗器（EQ-500）；高效液相色谱仪（岛津-15C）；TB-215D型电子剖析天平；AL-204型电子剖析天平；EMS-50型磁力拌和水浴锅；R-202旋转蒸腾器。
2 成果
2.1 办法1
色谱条件：色谱柱：CNW Athena C18-WP（5μm，150mm×4.6mm）；以甲醇-水（94：6）为活动相；流速为1.0mL/min；柱温：40℃；检测波长为300nm。
对照品溶液的制备：精细称取维生素A对照品5.67mg至50mL容量瓶，并用95%乙醇溶解定容至50mL，摇匀即得，作为规范储藏母液。精细称取芘内标物32.18mg至500mL容量瓶，并用95%乙醇溶解定容至刻度，摇匀即得内标溶液。精细量取1mL维生素A视黄醇对照品储藏母液至50mL容量瓶，加95%乙醇溶解并定容，以95%乙醇为空白，在325nm波利益测定其吸光度。按C=A/1835÷100×1 000 000核算，其间C是浓度（单位为μg/mL），A是均匀吸光度，1835是吸光系数，100是%系数转化因子，1 000 000是单位转化系数。精细汲取对照品溶液0.5、1、2、3、5mL置于25mL容量瓶中，精细参加内标溶液3mL，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得5个不同浓度的对照品溶液，浓度为2.00272μg/mL，4.00544μg/mL，8.01088μg/mL，12.01632μg/mL，20.02720μg/mL。
供试品溶液的制备 取3个不同批号的汤臣倍健维生素A维生素D软胶囊（儿童型），别离编号为1、2、3。各取20粒样品，挤出内容物，拌和均匀后精细称取试样约0.075g于250mL三角瓶中，用95%乙醇约50mL使其溶解，直到颗粒物涣散均匀停止。参加10%抗坏血酸水溶液5mL、3mL芘内标液、10mL氢氧化钾水溶液（1∶1），混匀。于沸水浴回流60min使皂化彻底。皂化后当即放入冰水中冷却。用50mL的水分两次将皂化液悉数转入500mL分液漏斗中，参加100mL乙醚，悄悄摇摆，排气后盖好瓶塞，室温下振动约10min后静置分层，将水相转入另一500mL分液漏斗中，按上述办法进行第2次萃取。兼并醚液，用水洗至近中性。醚液通过无水硫酸钠过滤脱水，滤液收入500mL圆底烧瓶中，于旋转蒸腾仪上在（50±2）℃充氮条件下蒸至近干（绝不允许蒸干）。残渣精细参加95%乙醇25mL，超声波提取溶解，过滤，即得。
2.1.1 测定法 别离精细汲取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.1.2 规范曲线 按上述色谱条件测定。
2.2 办法2
2.2.1 色谱条件 色谱柱：ACCHROM Unitary C18（2.8μm，150mm×4.6mm）；以甲醇-水（98：2）为活动相；流速为1.0mL/min；柱温：40℃；检测波长为325nm。
2.2.2 对照品溶液的制备 称取维生素A醋酸酯对照品5.51mg到50mL容量瓶中，加适量甲醇，超声使其溶解，加甲醇定容至刻度，摇匀，作为规范储藏母液。准确量取5mL规范储藏母液到50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45μm的滤膜，即得。
2.2.3供试品溶液的制备 别离取编号为1、2、3的样品，挤出内容物，拌和均匀后精细称取试样约0.55g置于25mL容量瓶中，加甲醇适量，于50～55℃超声，并不时振摇样品，30min后取出，冷却，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀，过0.45μm的滤膜，即得。
2.2.4 测定法 别离精细汲取对照品溶液2μL、5μL、10μL、25μL、40μL与供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2.5 规范曲线 按上述色谱条件测定，所测峰面积见表3。
经检测，两种办法得出的含量均在规则规模之内（50.00～83.25mg/100g），办法1为国家规范GB/T 5009.82-2003所运用的办法，通过验证两种不同的查验办法，所测出的维生素A的含量相差较小，相对误差均在1.0%之内，证明两种测定办法均科学有用，能对汤臣倍健维生素A维生素D软胶囊（儿童型）中维生素A的含量起到质量操控的意图。而办法2的对照品制造办法、样品处理办法更为方便简略，耗用时刻短，溶剂运用量少，可以节约查验本钱，进步人员利用率，更为合适本企业。
3 评论
因为维生素A性质不稳定，剖析时刻长会形成维生素A分化，故应尽量缩短剖析时刻。通过紫外光谱测定，在该色谱条件下，维生素A在325nm波利益有最大吸收，因而办法2中挑选325nm作为检测波长；活动相中甲醇与水的份额通过试验，当份额为（94∶6）时样品中维生素A与内标物的别离较好，且维生素A保存时刻适中，故办法1选用该份额进行测定；在办法1中，当运用乙醚进行萃取后静置，有部分样品会呈现乳化现象。当呈现该现象时，往分液漏斗中参加适量纯化水或许95%乙醇，即可消除该现象。
[参阅文献]
[1] 李东文.HPLC检测复合鱼肝油制剂中维生素A含量的可行性[J].河北医药，2013，35（12）：1986-1987.
[2] 苏佳妍，岳青阳，于大海.维生素A含量测定办法的研讨[J].山西医药杂志，2010，39（6）：557-558.
[3] 李剑虹，朴建华，郭宁，等.儿童维生素A与铁营养状况的相关性研讨[J].卫生研讨，2006，35（2）：182-184.
[4] 李铭.HPLC法测定六合维生素丸中维生素A的含量[J].我国药师，2012，15（4）：464-465.
[5] 宋金春，李韵秋.HPLC法测定注射用复合维生素中维生素D2，维生素A与维生素E的含量[J].我国药房，2007，18（31）：2456.
[6] 黄敏，黄增琼.高效液相色谱法测定复合鱼肝油制剂中维生素A的含量[J].广西医科大学学报，2007，24（3）：600-601.
[7] 钱玲慧，廖佳宇，李亚妮，等.测定维生素A的三种办法比较[J].试验技能与办理，2012，29（5）：43-48.
[8] 肖素荣，南家莲.维生素A生理学效应研讨[J].潍坊教育学院学报，2002，15（1）：45-47.
[9] 孙璐璐，刘毅.维生素A的免疫学研讨进展[J].畜牧兽医科技信息，2011（2）：3-5.
[10] 陈咏，楼永明.固相萃取-HPLC法测定鱼肝油乳中维生素A的含量[J].海峡药学，2009，21（4）：64-65.
[11] 段玉林，苏骏，昊雪，等.高效液相色谱测定广西生鲜乳中的维生素A[J].我国乳品工业，2012，40（5）：58-60.
[12] 吴小松，刘沐雨，曹玉发，等.HPLC法测定婴儿配方奶粉中维生素A含量的不确定度鉴定[J].食品工业科技，2013，34（9）：309-311.
[13] 许蕴，马经野，付林，等.双波长高效液相色谱法测定人血清中维生素A、E的含量[J].我国医院药学杂志，2006，26（4）：412-414.
（收稿日期：2014-10-21）