二甲双胍缓释片瘦身 二甲双胍对实验性糖尿病牙周炎大鼠牙周组织的影响

黄辉　黄炫赓　于大海

[摘要] 意图 研讨试验性糖尿病牙周炎大鼠牙周安排的改变，评论二甲双胍对其影响。 办法 将240只雄性大鼠随机分红试验组（二甲双胍医治）、糖尿病牙周炎组、牙周炎组和空白对照组，每组各60只大鼠。动物模型树立后3周、6周和9周分批处死10只大鼠取样，丈量试验牙近中牙槽嵴顶至釉牙骨质界的间隔（CEJ-A），比较各组光密度值。 成果 在术后3周、6周和9周3个时刻点，试验组大鼠的CEJ-A和光密度值高于空白对照组而低于糖尿病牙周炎组和单纯牙周炎组；并且跟着时刻的推移，糖尿病牙周炎组和单纯牙周炎组的CEJ-A值逐步升高，试验组CEJ-A值逐步下降，空白对照组则没有显着改变；除试验组光密度值逐步下降，其他三组则没有显着改变。 定论 二甲双胍对试验性糖尿病牙周炎大鼠的牙周安排具有维护效果。

[要害词] 二甲双胍；大鼠；糖尿病；牙周炎

[中图分类号] R781.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）04-0043-04

[Abstract] Objective To investigate the changes in periodontium in rats with experimental diabetic periodontitis and estimate the influence of metformin on the periodontium. Methods 240 male rats were divided randomly to experimental group（metformin treatment）， diabetic periodontitis group， periodontitis group and control group， with 60 rats in each group. Every 10 rats were sacrificed at the time point of 3 weeks， 6 weeks and 9 weeks after the establishment of the model. The distance from alveolar crest to cemento-enamel junction（CEJ-A） was measured， and the optical density value amorg groups was compared. Results At postoperative 3w， 6w and 9w time points， the CEJ-A distance and optical density in the experimental group was higher than that of the control group， while less than that of the diabetic periodontitis group and periodontitis group. CEJ-A value in the diabetic periodontitis group and periodontitis group gradually increased over time， meanwhile， the value of the experimental group descended eventually， and that of the control group remained no noticeable changes. By contrast， optical density of experimental group gradually descended， while that of the other groups remained no changes. Conclusion Metformin has protective effect on periodontium of rats with experimental diabetic periodontitis.

[Key words] Metformin； Rat； Diabetes； Periodontitis

牙周炎在糖尿病人群中發病率较高，糖尿病人群中兼并牙周炎者可高达85%～90%[1]。糖尿病可添加牙周炎的发病危险和加剧牙周安排损坏程度，牙周炎与糖尿病相互影响，互为高危要素，牙周炎已被认为是糖尿病的第六大并发症[2]。作为医治2 型糖尿病的一线用药，二甲双胍亦具有必定的抗炎[3]、抗氧化效果[4]。本研讨评论二甲双胍对试验性糖尿病牙周炎大鼠牙周安排的影响。

1 材料与办法

1.1 材料

从广西医科大学动物中心分批收购同种系的清洁级Wistar雄性大鼠240只，200 g左右/只。由电脑生成随机数字，并由此随机分红试验组（糖尿病牙周炎大鼠+二甲双胍医治）、糖尿病牙周炎组、单纯牙周炎组和空白对照组，每组各60只大鼠。

1.2 办法

1.2.1 首要试剂和仪器 Caspase-3兔抗鼠多克隆抗体（CST公司，批号：9662S），免疫组化检测试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司，批号：K175622F），图画剖析软件（美国BIO-RAD Laboratories公司），显微镜（日本OLYMPUS公司）。

1.2.2 糖尿病模型树立 大鼠适应性喂食3 d，给予足量的饲料，自在饮水。禁食12 h，链脲佐菌素（STZ）运用前用0.1 mol/L pH4.5的枸橼酸缓冲液配制成2%浓度，依照60 mg/kg的剂量，一次性腹腔打针。3 d后取鼠尾静脉血检测血糖，血糖浓度≥19 mmol/L归入试验组；<19 mmol/L则继续腹腔打针STZ（30 mg/kg），3 d后再测血糖，血糖浓度≥19 mmol/L继续归入试验组，<19 mmol/L扫除。

1.2.3 牙周炎模型树立 试验组、糖尿病牙周炎组大鼠在糖尿病模型树立3 d后，以及单纯牙周炎组大鼠在喂食3 d后用10%的水合氯醛腹腔打针麻醉大鼠，用直径0.2 mm正畸结扎丝加丝线结扎大鼠右上颌榜首磨牙牙颈部。空白对照组大鼠适应性喂食3 d后，打针平等剂量的柠檬酸缓冲液。3 d后10%的水合氯醛腹腔打针麻醉大鼠，不作干涉待其天然复苏。

1.2.4 模型树立后的喂食 试验组、糖尿病牙周炎組、单纯牙周炎组及空白对照组继续一般饲料喂食。试验组大鼠给予二甲双胍100 mg/（kg·d）灌胃，其他组给予同体积蒸馏水灌胃。

1.3检测目标

1.3.1 标本收集 在结扎后3周、6周和9周，每组每批处死10只大鼠，断头法处死大鼠，敏捷别离大鼠上颌骨，在上颌中线处将其一分为二。经过大体相片及X线片调查右上颌榜首磨牙牙槽骨吸收状况，截取的安排块脱钙、梯度脱水、白腊包埋、切片，用于HE染色和细胞凋亡蛋白检测。

1.3.2 骨吸收丈量 将白腊切片用苏木素-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色，德国DMR+Q550病理图画剖析仪丈量釉牙骨质界（CEJ）至榜首磨牙近中牙槽嵴顶（A）的垂直间隔（CEJ-A），以点评各组大鼠右上颌榜首磨牙牙槽骨的吸收状况，均取5张切片的均匀值。

1.3.3 光密度值检测 按阐明进行操作。成果判别：Caspase-3阳性染色为细胞质和（或）细胞内棕黄色颗粒上色。将切片在高倍镜下（×400）调查，并随机选取3个有阳性细胞密布面且不堆叠的视界，核算阳性细胞的均匀光密度，以光密度值标明Caspase-3蛋白表达量。

1.4 统计学处理

选用SPSS17.0统计学软件剖析数据，计量材料选用重复丈量方差剖析，按α=0.05水准，P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 各组CEJ-A和光密度值术后改变

一切施行进程均由同一人完结。终究完结120只大鼠标本的收集，各组各目标数据见表1。

2.2 CEJ-A重复丈量数据方差剖析成果

见表2。CEJ-A的时刻要素（F时刻=93.860，P<0.001）以及时刻和分组的交互效果（F时刻×分组=82.579，P<0.001）有统计学含义，提示CEJ-A有随时刻改变的趋势并且时刻要素的效果跟着分组的不同而不同。结合表3和图1可直观地看到，CEJ-A在不同组别、不一起刻点方面有差异（F分组=1667.183，P<0.001）。在术后3周、6周和9周3个时刻点，CEJ-A值最高为糖尿病牙周炎组，其次为单纯牙周炎组，再次试验组，空白对照组则最低；并且跟着时刻的推移，糖尿病牙周炎和单纯牙周炎组的CEJ-A值逐步升高，试验组逐步下降，空白对照组则没有显着改变。

2.3 光密度重复丈量数据方差剖析成果

如表2、表3所示，光密度的时刻要素（F时刻=197.396，P<0.001）、时刻和分组的交互效果（F时刻×分组=203.896，P<0.001）以及分组要素（F分组=125.735，P<0.001）差异有统计学含义，提示光密度有随时刻改变的趋势，在不同组别、不一起刻点有差异。结合图2可直观地看到，在术后3周、6周和9周3个时刻点，光密度值最高是糖尿病牙周炎组，其次是单纯牙周炎组，再次试验组，空白对照组则最低；并且跟着时刻的推移，除试验组的光密度值逐步下降，其他三组则没有显着改变。

3评论

牙周炎是在病原体及其产品效果下，部分安排内免疫细胞很多滋润开释炎症介质，进一步激活巨噬细胞等免疫细胞开释细胞因子，很多炎性介质介导免疫细胞黏附集合到炎症部位，然后构成部分安排损坏[5]。而糖尿病可引起继续更久的炎症反响，更多的附着损失，更严峻的牙槽骨吸收，使骨修正才能显着受损，阻碍新骨构成[6]。已有研讨标明，糖尿病牙周炎大鼠牙周安排中骨衬细胞、成骨细胞和牙周膜成纤维细胞的凋亡添加，成骨细胞数目下降，骨构成削减[7]。在本次研讨中咱们也发现，在术后3周、6周和9周3个时刻点，CEJ-A值最高是糖尿病牙周炎组，其次是单纯牙周炎组，再次试验组，空白对照组则最低；并且跟着时刻的推移，糖尿病牙周炎和单纯牙周炎组的CEJ-A值逐步升高，试验组逐步下降，空白对照组则没有显着改变。这阐明糖尿病牙周炎大鼠牙周安排损坏最严峻，其次是单纯牙周炎者，损坏较少的是运用二甲双胍喂食的大鼠牙周安排，提示二甲双胍对糖尿病牙周炎大鼠牙周安排具有维护效果。

细胞凋亡是细胞逝世的另一种方式，其机制是细胞内特定的信号分子发动，且由基因调控的自我消亡进程。炎症细胞的凋亡参加牙周炎的发作、发展进程[8]，而细胞凋亡在牙周炎牙槽骨吸收中起着重要效果[9]。Mashat等[10]研讨曾标明糖尿病可添加Caspase-3的活性，并证明糖尿病牙周炎牙周安排损失的重要机制是成纤维细胞和成骨细胞凋亡的增强。二甲双胍（Metformin）是 2型糖尿病医治的一线用药，现在研讨指出二甲双胍能够按捺细胞凋亡的发作[11，12]。为进一步评论二甲双胍对骨安排的维护效果机制，咱们也对大鼠牙周安排Caspase-3的表达进行检测。Caspase-3是Caspase宗族在凋亡级联反响中最为要害的凋亡蛋白酶。Caspase-3激活后，可降解DNA损害修正酶，一起激活核酸内切酶，促进细胞凋亡[13]。在研讨中发现，光密度值表达最高的是糖尿病牙周炎组，其次是单纯牙周炎组，再次试验组，空白对照组则最低；并且跟着时刻的推移，除试验组的光密度值表达逐步下降，其他三组没有显着改变。光密度值表达改变与CEJ-A的改变趋势是共同的，提示光密度值表达代表了细胞凋亡的改变，详细到牙周安排中就是CEJ-A的改变，也直接反映骨损坏的削减。而喂食二甲双胍的大鼠则有抗凋亡的体现，体现为光密度值活性下降，与王小芳等[14]的研讨成果类似，其在原代心肌细胞的凋亡试验中也证明了二甲双胍可显着按捺Caspase-3的表达。其机制或许在于二甲双胍经过激活AMPK，按捺NF-κb的激活及活性氧族的生成，削减Caspase-3的表达[15]。

综上所述，二甲双胍可按捺凋亡蛋白的表达，削减成骨细胞的凋亡，削减骨损坏添加。因而，二甲双胍对试验性糖尿病牙周炎大鼠的牙周安排具有维护效果。

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（收稿日期：2017-11-15）