胃癌前病变 Rab27B mRNA在胃癌和胃癌前病变安排中的表达及临床意义
李琪儿+叶国良+郭俊明
[摘要] 意图 了解Rab27B mRNA在胃癌安排和胃癌前病变安排中的表达状况及及其临床含义。 办法 使用实时定量逆转录聚合酶链反响（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）技能检测胃癌安排及配对的癌旁安排中Rab27B mRNA的表达量；使用qRT-PCR技能检测胃癌前病变安排及配对的正常胃黏膜安排中Rab27B mRNA的表达量。 成果 Rab27B mRNA不只在胃癌安排中表达下降（P=0.009），并且在胃癌前病变安排中表达也下降（P=0.013）。Rab27B mRNA在胃癌安排中的表达量较癌旁安排均匀下降1.8倍。Rab27B mRNA的表达量与胃癌的分解程度有关（P=0.009）。 定论 Rab27B mRNA或许参加了胃癌的发作，具有成为胃癌肿瘤标志物的潜在价值。
[要害词] Rab27B；胃癌；胃癌前病变；肿瘤标志物
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）26-0004-04
Expression and its clinical significance of Rab27B mRNA in gastric cancer and gastric premalignant lesions
LI Qier1 YE Guoliang1 GUO Junming2
1.Department of Gastroenterology， the Affiliated Hospital of Ningbo University School of Medicine， Ningbo 315020， China；2.Ningbo University School of Medicine， Ningbo 315211， China
[Abstract] Objective To understand the expression of Rab27B mRNA in gastric cancer and gastric premalignant lesions and its clinical significance. Methods Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction（qRT-PCR） was used to detect Rab27B mRNA expression in gastric cancer tissues and adjacent non-tumorous tissues. Then， Rab27B mRNA expression in gastric premalignant lesions and matched normal tissues were explored. Results Rab27B mRNA was not only significantly down-regulated in gastric cancer tissues（P=0.009）， but also decreased in gastric Premalignant lesions（P=0.013）. Compared to paired adjacent normal tissues， Rab27B mRNA was down-regulated with an average level 1.8-fold in cancer tissues. The expression level of Rab27B mRNA was closely correlated with poor differentiation（P=0.009）. Conclusion Rab27B mRNA may play important role in gastric cancer initiation and it has potential capacity to be tumor marker for gastric cancer.
[Key words] Rab27B； Gastric cancer； Premalignant lesion； Tumor marker
我国是胃癌高发区域，其发病率居恶性肿瘤第2位，死亡率居恶性肿瘤死因第3位[1]。前期确诊对胃癌的预后起着至关重要的效果。前期胃癌的5年生存率可达90%以上，而进展期胃癌则缺乏50%[2-3]。因为传统的肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）等确诊胃癌的灵敏度和特异度均不高，因此有必要寻求新式的生物学标志物。Rab27B是致癌基因RAS宗族成员之一，现在已发现其与肝癌、乳腺癌、结肠癌相关[4-6]。咱们使用实时定量逆转录-聚合酶链反响（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction， qRT-PCR）技能检测了Rab27B mRNA在胃癌安排和胃癌前病变安排中的表达量，并剖析其与胃癌患者临床病理要素的联系，为Rab27B mRNA成为胃癌筛查和前期确诊的标志物供给了重要的试验室根据。
1 资料与办法
1.1 样本搜集
从2012年12月～2014年4月于宁波大学医学院隶属医院和鄞州人民医院共搜集胃癌安排101例、胃癌前病变安排30例。101例胃癌患者中男73例，女28例，年纪39～81岁，均匀（64.2±9.5）岁。30例胃癌前病变患者中男18例，女12例，年纪38～81岁，均匀（60.8±10.4）岁。一切胃癌患者均经过外科手术，术后病理确诊胃癌，且术前均未承受任何放化疗；一切胃癌前病变患者均经过内镜黏膜下剥离（endoscopic submueosaI dissection，ESD）术，术后病理确诊胃黏膜中重度异型增生。用于本试验研讨的人体标本均事先由患者或其委托人签署知情同意书并得到了宁波大学医学道德委员会的同意。搜集一切病变安排标本的一起搜集相应的间隔病灶大于5 cm处正常安排1份，搜集的新鲜安排标本当即浸泡于无氮样品保存液中，-80℃下保存备用。
1.2 试剂
无氮样品保存液购自北京百泰克生物技能有限公司；Trizol试剂购自德国Invitrogen公司；GoScriPt逆转录试剂盒和GoTaqR qPCR Master Mix试剂盒均购自美国Promega公司。
1.3 试验办法
使用Trizol法抽提安排总RNA，提取的总RNA用紫外分光光度计测定浓度并检测质量。A260/A280在1.8～2.0范围内可以为总RNA纯度牢靠。取2 μg总RNA用于逆转录组成cDNA，逆转录反响选用GoScriPt逆转录试剂盒。所取得的cDNA稀释5倍后作为模板，选用GoTaqR qPCR Master Mix试剂盒，在Mx3005P荧光定量PCR仪（Srratagene公司）上检测Rab27B mRNA的表达量。Rab27B mRNA的引物序列：上游：5'-AGGCTATTCTCTGGGATGAGTG-3'，下流：5'-TCTGCTGTATTTAAGGGCACAA-3'；外参甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）的引物序列：上游：5'-ACCCACTCCTCCACCTTTGAC-3'，下流：5'- TGTTGC TGTAGCCAAATTCGTT-3'。扩增条件设定：95℃ 5 min（预变性），94℃ 15 s（变性），54℃ 30 s（退火），70℃ 30 s（延伸）。循环40次。
1.4 成果断定
选用ΔCt法核算Rab27B mRNA相对表达量。核算公式：ΔCt=Ct（Rab27B）-Ct（GAPDH），ΔΔCt=Ct（试验组）-Ct（对照组）。ΔCt值越小则表达量越高。试验组是指胃癌安排及癌前病变安排，对照组是指相对应的癌旁安排和正常安排，试验组意图基因的表达量相对于对照组改变的倍数用2ΔΔCt来表明。
1.5 计算学剖析
选用SPSS17.0计算软件进行剖析，别离选用两独立样本t查验（unpaired students t-test）、配对样本t查验（paired students t-test）和方差剖析（ANOVA），P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 Rab27B mRNA在胃癌安排中的表达状况
使用qRT-PCR技能检测101对胃癌安排和配对癌旁安排中Rab27B mRNA的表达量，成果显现，Rab27B mRNA在胃癌安排中的表达量显着低于癌旁安排（P=0.009，封三图3），均匀下降1.8倍。61%（62/101）胃癌安排中Rab27B mRNA的表达量低于癌旁安排。
2.2 Rab27B mRNA在胃癌前病变安排中的表达状况
使用qRT-PCR技能检测30对胃癌前病变安排和配对正常安排中Rab27B mRNA的表达量，成果显现，Rab27B mRNA在胃癌前病变安排中的表达量也显着下降（P=0.013，封三图4）。
2.3 Rab27B mRNA的表达量与胃癌患者临床病理要素的联系
进一步比较Rab27B mRNA水平与胃癌患者临床病理要素的联系，包含年纪、性别、TNM分期[7]、滋润深度、肿瘤巨细、分解程度和淋巴结搬运状况。成果显现，Rab27B mRNA水平与胃癌的分解程度相关（P= 0.009，表1），其表达水平越低，则分解程度也越低。
表1 Rab27B mRNA的表达水平（ΔCt）与胃癌患者临床病理要素的联系（x±s）
3 评论
现在我国的前期胃癌确诊率缺乏10%[8]。胃癌的确诊首要依托内窥镜查看，因为内窥镜查看的有创性注定其不适于广泛筛查。有文献报导，大范围筛查有助于进步前期胃癌的检出率[9]。抱负的筛查手法不只要具有无创、方便、经济等特色，还应该具有高灵敏度和特异度，但传统的肿瘤标志物如CEA，它的灵敏度和特异度别离仅为30%[10]和23.2%[11]。为此，咱们期望可以发现更为抱负的候选肿瘤标志物。
Rab蛋白归于Ras宗族的小GTP酶，参加和调理囊泡的运送[12]。Rab27由Rab27A和Rab27B组成。相对于Rab27A，Rab27B的表达更为限制，首要表达于脑垂体、膀胱、结肠、胃和胰腺[13-16]。
研讨最早的是Rab27B与乳腺癌的联系。Hendrix等[4]发现Rab27B调理雌激素受体（estrogen receptor，ER）阳性的乳腺癌细胞侵袭性成长和搬运，Rab27B的高表达与乳腺癌的不良预后密切相关。尔后又有研讨显现Rab27B的高表达与乳腺癌的淋巴结搬运、临床分期晚、病理分型恶性程度高有关，Rab27B表达量高的患者生存期较短[17]。新近研讨发现结肠癌安排中Rab27B的表达量均显着高于癌旁安排，且Rab27B蛋白的表达与淋巴结搬运、远处搬运和TNM分期有关[5]。但Rab27B却被证真实原发性肝癌安排中的表达量较癌旁安排下降[6]。咱们的研讨发现Rab27B mRNA在胃癌安排中的表达也下降。由此可见，Rab27B既可作为致癌基因又可作为抑癌基因，其在胃癌和肝癌中的效果机制或许不同于乳腺癌和结肠癌。咱们进一步剖析了Rab27B mRNA的表达量与胃癌患者临床病理要素的联系，成果发现Rab27B mRNA的低表达与分解程度低有关。
胃黏膜异型增生是胃黏膜发作癌变的要害阶段，被以为是胃癌前病变[8]，现在已有研讨发现许多癌症相关基因在癌前病变安排中已出现了反常表达。Gibb等[18]进行了一项人类口腔黏膜癌及癌前病变的lncRNA表达图谱，发现在癌安排中反常表达的lncRNA中有60%在癌前病变安排中也存在反常表达。Shao等[19]证明HMlincRNA717在胃癌安排和胃黏膜异型增生安排中的表达量均较正常黏膜下降。屈王蕾等[20]经过免疫安排化学法检测ToPoⅡα蛋白在正常宫颈安排、宫颈癌癌前病变安排-宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）和宫颈鳞癌安排中的表达，成果发现TopoⅡα蛋白表达在CINⅡ、CINⅢ和宫颈鳞癌安排中上调。本研讨发现Rab27B mRNA不只仅在胃癌安排中低表达，并且在胃癌前病变安排中也表达下降，阐明Rab27B或许在胃癌的发作过程中起重要效果。
综上所述，Rab27B mRNA在胃癌安排及胃癌前病变安排中均出现低表达，有或许成为胃癌筛查和前期确诊的新式标志物。
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（收稿日期：2015-05-18）