食管胃底静脉曲张出血的医治办法 TopoⅡ、Ki—67、P53在胃食管结合部腺癌新辅佐化疗效果猜测中的含义
张志忠等
[摘要] 意图 评论Topo Ⅱ、Ki-67和P53 在Siewert Ⅱ型胃食管结合部腺癌中的表达与化疗灵敏性之间的联系。办法 回忆性剖析本院2010年6月～2013年12月行新辅佐化疗的胃食管结合部腺癌患者72例。对一切患者均行SOX计划化疗，以RECIST 1.0点评规范点评效果。用免疫组化办法点评3种蛋白的表达状况，剖析各蛋白表达状况及与化效果果的联系。 成果 年纪和病理类型与化疗灵敏性无关，本组72例患者中新辅佐化疗有功率为48.6%，其间5例达病理完全缓解。3种蛋白的表达状况别离为：Topo Ⅱ阳性率为73.6%， Ki-67阳性率为59.7%， P53阳性率为33.3%。 Ki-67和P53的表达与化疗灵敏性有关（P=0.023，P=0.031），但Topo Ⅱ的表达与化疗灵敏性无关（P>0.05）。 定论 Ki-67高表达和P53低表达是AGEJ SOX计划新辅佐化疗灵敏性的影响要素，为AGEJ个体化新辅佐化疗计划的挑选供给有利的参阅。
[关键词] 胃食管结合部肿瘤；新辅佐化疗；Topo Ⅱ； Ki-67；P53；化疗灵敏性
[中图分类号] R737.9 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）04-0113-04
[Abstract] Objective To investigate the expression of Topo Ⅱ， Ki-67， P53 in advanced adenocarcinoma of gastroesophageal junction（AGEJ） and its relationship to sensitivity of neoadjuvant chemotherapy. Methods Clinical data of 72 patients of locally advanced AGEJ between June 2010 and Dec 2013 were analyzed retrospectively. All patients were given SOX neoadjuvant chemotherapy and the responses to treatment were evaluated according to RECIST 1.0. Expressions of 3 proteins were detected by in all patients before neoadjuvant chemotherapy. Detecting the expressions of Topo Ⅱ， Ki-67， P53 by immunohistochemistry is to analyze its relationship to neoadjuvant chemotherapy. Results The chemotherapy sensitivity had no correlation with age and pathological types（P>0.05）. The overall response rates was 48.6%， including complete response in 5 cases and progressive disease in 6 cases.The positive expression rates of Topo Ⅱ， Ki-67 and P53 in AGEJ were 73.6%，59.7% and 33.3%. Ki-67 and P53 were significantly correlated with chemotherapy sensitivity（P=0.003，P=0.020）， while Topo Ⅱ was not correlated with chemotherapy sensitivity（P>0.05）. Conclusion An elevated expression of Ki-67 and depressed expression of P53 are important factors for SOX insensitivity in AGEJ. They may provide an useful reference for designing individualized chemotherapeutic regimens for AGEJ patients.
[Key words] Gastroesophageal junction neoplasms； Neoadjuvant chemotherapy；Topo Ⅱ； Ki-67；P53；Chemosensitivity
近年来胃食管结合部腺癌（adenocarcinoma of gastroesophageal junction，AGEJ）的发病呈添加趋势[1，2]。现已证明新辅佐化疗对开展期胃癌能进步手术切除率、削减术后复发搬运、延伸生存期[3]。但关于Siewert Ⅱ型胃食管结合部腺癌新辅佐化疗的效果针对性研讨较少。寻觅牢靠的化疗灵敏性猜测目标、前期筛选出对化疗应对不灵敏的患者、削减不必要的术前化疗，已成为重要临床课题之一。结合既往胃癌方面的研讨成果，咱们回忆性检测3种蛋白质：Topo Ⅱ、Ki-67和P53在AGEJ癌活检标本中的表达，研讨化疗药物灵敏性的差异，寻觅牢靠的化疗灵敏性猜测目标、希望筛选出或许对SOX计划新辅佐化疗灵敏的猜测因子，为AGEJ癌的个体化医治供给重要的依据。
1材料与办法
1.1一般材料
搜集2010年6月～2013年12月在河南省安阳市肿瘤医院行新辅佐化疗的72例开展期Siewert Ⅱ型AGEJ癌患者。其间男63例，女9例；年纪40～76岁（中位年纪67岁）；医治前临床分期均为cT3～4Nl～3。术前病理类型：中、低分解腺癌66例（其间4例伴印戒细胞癌，7例伴黏液腺癌），高分解腺癌2例，黏液腺癌3例，印戒细胞癌1例。研讨目标的挑选规范：①胃镜活检病理确诊为腺癌；②扫除远处搬运；③腹部增强CT显现部分肿块侵略胃壁全层（T3或T4）或有区域淋巴结肿大；④一切患者膂力状况（ECOG）评分为0～2分，且无严重心、肺、肝、肾等脏器功用反常者；⑤无其他恶性肿瘤病史及放化疗史者；⑥签署知情同意书，情愿承受术前化疗及手术者。
1.2医治计划
一切患者行SOX计划新辅佐化疗：奥沙利铂注射液130 mg/m2静脉滴注2～3 h d1+替吉奥胶囊40～60 mg bid po d1～14。3周后重复，共2次。化疗一起予以地塞米松、西米替丁、格拉司琼、苯海拉明等辅佐用药医治。化疗完毕后4周进行术前效果点评，若无肿瘤开展则行规范胃食管结合部腺癌彻底治好术（D2）。术后给予惯例辅佐化疗。
1.3 检测办法
1.3.1 临床检测 新辅佐化疗前对活检肿瘤安排作3种蛋白检测，在新辅佐化疗前后别离进行胃镜（或超声胃镜）、64排增强CT查看以比照效果点评，手术者术后走病理安排学查看、效果点评。
1.3.2 免疫组化检测 标本的处理及免疫安排化学染色：一切标本用10%甲醛固定，白腊包埋，接连切片厚4 μm。玻片用多聚-L-赖氨酸涂覆，惯例苏木素-伊红（HE）染色，断定病理类型。选用柠檬酸缓冲液微波抗原修正法。试验试剂：鼠抗人Topo Ⅱ（Ki-S1）、鼠抗人Ki-67（MAB-0129）、鼠抗人P53（DO-7）、即用型单克隆抗体、检测试剂盒（KIT-9701）、阳性对相片均购自福州迈新生物技术开发公司，操作按说明书进行。
S-P免疫安排化学染色办法简述如下：白腊切片经惯例二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；柠檬酸缓冲液高温高压抗原修正；滴加过氧化酶阻断液室温10 min，磷酸盐缓冲液（PBS） pH=7.2冲刷后滴非免疫性动物血清室温10 min，滴加第1抗体即抗Topo Ⅱ、抗Ki-67、抗p53，4℃冰箱孵育过夜；PBS冲刷后滴加生物素符号的第2抗体室温10 min；PBS冲刷后滴加链霉素亲和素-过氧化物酶溶液室温10 min，PBS冲刷后二氨基联苯胺（DAB）显色，冲冼，苏木素复染，封片，显微镜调查。每次试验用已知阳性切片作阳性对照，用PBS替代一抗作为阴性对照。Topo Ⅱ、Ki-67、P53蛋白均定坐落细胞核，以细胞结构中存在粗细共同的棕黄色颗粒为阳性。阳性细胞数<50%标明基因低表达，计为（-），而≥50%则标明基因高表达，计为（+）。以上成果由2名病理学专家阅片判别。
1.4 效果判别
以新辅佐化疗前后胃镜（或超声胃镜）、64排增强CT及术后病理切片作为效果判别的依据。新辅佐化疗后原发病灶的效果断定依据RECIST 1.0[4]规范评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病安稳（SD）、疾病开展（PD）。以CR+PR核算有功率（RR）。毒性反响选用NCI-CTC 3.0不良反响分级规范断定[5]。
1.5 计算学剖析
运用SASW18.0计算软件，计量材料选用t查验，计数材料选用χ2查验，相关剖析选用Logistic多要素回归剖析及Spearman秩相关处理相关数据。查验水准α=0.05。
2成果
2.1 病理特征
分解杰出型[6]（包含管状腺癌、乳头状腺癌、高中分解腺癌）38例，分解不良型（低分解腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌、未分解癌和单纯癌）34例。PD患者共6例未行手术医治，余66例均行R0切除，年纪<65岁者45例，≥65岁者27例。患者年纪、肿瘤分解程度与化效果果联系见表1。
2.2 医治状况
本组72例患者悉数完结新辅佐化疗SOX三周计划两个周期。不良反响首要为厌恶、吐逆、粒细胞削减、血小板削减、外周神经毒性，经对症医治后缓解，未呈现Ⅲ度及以上毒副反响。新辅佐化疗后4周行规范胃食管结合部腺癌彻底治好术（D2），术中进行肿瘤丈量。术后并发症：3例患者呈现符合口出血，2例患者呈现符合口瘘，均保存医治后治好。
2.3 新辅佐化疗成果及术后病理成果
本组66例手术患者新辅佐化疗归纳效果判别：5例CR（6.9%），30例PR（41.7%），31例SD（43.1%）。新辅佐化疗总有功率RR（CR+PR）为48.6%，显现对SOX三周计划化疗灵敏。术后病理成果：5例未见残留癌细胞，均为低-中分解腺癌或低分解腺癌，而且不兼并黏液腺癌或印戒细胞癌等其他成分。4例仅见灶状散在癌细胞簇，别离为中低分解腺癌、中分解腺癌兼并乳头状腺癌、低分解腺癌、中分解腺癌。显现单纯中低分解腺癌化效果果较好。术后病理分期（2010年美国癌症联合会（American Joint Committee on Cancer， AJCC）第7版TNM分期规范）[7]：术后病理9例无法分期（5例未发现残留癌细胞，4例癌细胞零星散布，无法断定T分期），Ⅱ期23例、Ⅲ期34例。
2.4 各个蛋白检测的成果
各蛋白的表达与年纪、分解程度无显着相关性（P>0.05）。在72例AGEJ癌标本中，3种蛋白的表达状况及与化效果果的联系见表2。Topo Ⅱ阳性表达为53例（73.6%），在CR+PR组和SD+PD组之间无显着性差异（P>0.05）；Ki-67阳性表达43例（59.7%），在CR+PR组中阳性率显着高于SD+PD组（χ2=8.593，P=0.003）；P53阳性表达24例（33.3%），在CR+PR组中阳性率显着低于SD+PD组（χ2=5.449，P=0.020）。多元回归成果显现Ki-67是影响胃食管结合部腺癌新辅佐化效果果的独立因子（P=0.015）。Spearman相关剖析显现：Topo Ⅱ的表达与Ki-67的表达呈正相关（r=0.405，P=0.001），而TopoⅡ与P53、Ki-67与P53的表达之间均无显着相关性（P>0.05）。
3评论
研讨标明[8]AGEJ与中远段胃癌在临床病理目标及分子符号物上存在显着差异，提示AGEJ与中远段胃癌的发作开展过程中或许存在不同的分子机制。新辅佐化疗在胃癌中遭到越来越多的注重，Li等[9]报导新辅佐化疗能显着改进我国人部分开展期胃癌的治效果果。但将AGEJ独自进行新辅佐化疗研讨的报导仍较少。肿瘤细胞耐药是下降消化道肿瘤患者生存率的首要原因。怎么猜测AGEJ化疗灵敏性的问题有待处理。如果能找到较为精确的猜测新辅佐化疗灵敏性标志物.将有助于临床医师依据肿瘤的分子生物学特征挑选更有用的医治计划，削减原发性耐药的份额，防止不获益的医治。
本研讨中使用SOX计划对AGEJ进行新辅佐化疗，有功率为48.6%，与胃癌的报导根本类似[10]，达到了降期、进步R0切除率的意图。本组72例患者新辅佐化疗不良反响首要为厌恶、吐逆、粒细胞削减、血小板削减、外周神经毒性，经相应医治后缓解，不良反响均在可操控范围内；术后并发症仅有3例符合口出血、2例符合口瘘，提示新辅佐化疗是安全的，并未添加手术并发症及手术危险。化效果果与年纪、分解程度无显着相关性。
本文回忆性研讨了Topo Ⅱ、Ki-67和P53在胃食管结合部腺癌新辅佐化疗前的表达，评论其与化疗灵敏性的联系。肿瘤细胞中Topo Ⅱ表达的增强能够进步以DNA拓扑异构酶为靶点的抗肿瘤药物的抗癌效果[11]。其含量下降及酶活性的改动引起易解离复合物构成削减，导致DNA损害削减而致药物耐受。在本研讨中Topo Ⅱ的表达与化效果果之间无显着相关，与在部分胃癌辅佐化疗中研讨[12，13]相共同，其表达尚不能猜测SOX计划在胃食管结合部腺癌新辅佐化疗的效果。Ki-67是一种细胞核抗原，仅在增殖细胞核中表达，与细胞的组成代谢有关， 其表达水平能较全面客观地反映肿瘤细胞的增殖状况，是较为抱负的检测细胞增殖活性的抗体。研讨已证明[14，15]，Ki-67是判别肿瘤患者化效果果的重要目标。本研讨的成果显现：Ki-67的表达与化疗灵敏性有关，Ki-67高表达患者对化疗灵敏，效果优于低表达患者，而且多要素回归剖析显现，Ki-67是独立的化疗灵敏性影响要素。骤变型P53基因是促癌基因，当该基因发作骤变时，对细胞凋亡的调控效果受阻，导致肿瘤细胞对化疗药物发生耐受性。本组成果显现，P53表达阳性者新辅佐化疗有功率显着低于表达阴性者，与胃癌[13，16]的研讨成果类似。Ki-67的表达与Topo Ⅱ的表达呈正相关（r=0.405，P=0.001），而Ki-67与P53表达无显着相关性（r=-0.090，P=0.49）。
总归，本研讨使用免疫组化检测了3种蛋白在AGEJ中的表达，发现Ki-67和P53与化疗灵敏性有关，可作为评价化疗预后的因子。
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（收稿日期：2014-12-08）