血清蛋白电泳实验报告 血清dp—ucMGP水平与2型糖尿病肾病终晚期肾脏病患者下肢动脉狭隘的相关性研讨
方向南+许荣+洪世华+柯瑞琼+洪欢山+吕维名
[摘要] 意图 评论血清非磷酸化-未羧化的基质gla蛋白（dephospho-uncarboxylated matrix glaprotein，dp-ucMGP）与2型糖尿病肾病终晚期肾脏病（end stage renal diseasr，ESRD）患者下肢动脉狭隘的联系。 办法 选取2015年10月～2016年10月在赣南医学院榜首附屬医院内分泌科或肾内科住院的2型糖尿病肾病ESRD非透析患者106例，依据双下肢动脉彩超分为三组：轻度狭隘组（n=56）、中度狭隘组（n=32）和重度狭隘组（n=18），测定血清HbA1c、Ca、P、LDL-C、CRP、PTH、25（OH）D、dp-ucMGP等目标，比较三组上述目标男性、年纪、病程、吸烟、心血管疾病病史和BMI的差异。 成果 三组血清dp-ucMGP水平别离为514（441，587）pmol/L、685（590，780）pmol/L、763（658，868）pmol/L，各组差异均有计算学含义（P<0.01）。三组患者中男性、年纪、吸烟史、心血管疾病病史、血清CRP、25（OH）D和dp-ucMGP水平差异均有计算学含义（P<0.05）。多要素回归剖析发现血清dp-ucMGP是2型糖尿病肾病ESRD患者下肢动脉狭隘的独立猜测因子，独立于年纪、性别、吸烟史、心血管疾病病史。 定论 血清高水平dp-ucMGP与2型糖尿病肾病ESRD患者下肢动脉狭隘独立相关。
[关键词] 非磷酸化-未羧化的基质gla蛋白；2型糖尿病；糖尿病肾病；动脉钙化
[中图分类号] R587.2；R692 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）35-0005-04
[Abstract] Objective To investigate the relationship between dephospho-uncarboxylated matrix glaprotein（dp-ucMGP） and stenosis of lower extremity artery in type 2 diabetic patients with end stage renal disease（ESRD）. Methods 106 ESRD non-dialysis patients with type 2 diabetic nephropathy hospitalized in Department of Endocrinology or Nephrology of First Affiliated Hospital of Gannan Medical College from October 2015 to October 2016 were selected. The patients were divided into mild stenosis group（n=56）， moderate stenosis group（n=32） and severe stenosis group（n=18）， according to the arterial ultrasonography in two lower extremities. The indicators including serum HbA1c， Ca， P and LDL-C， CRP， PTH， 25（OH）D and dp-ucMGP were measured. The differences in the above indicators， male， age， duration， smoking， cardiovascular history and BMI between the three groups were compared. Results The levels of serum dp-ucMGP in the three groups were 514（441， 587） pmol/L， 685（590， 780） pmol/L and 763（658， 868） pmol/L， respectively. There were significant differences among the three groups（P<0.01）. The differences of male， age， smoking history， cardiovascular disease history， serum CRP， 25（OH）D and dp-ucMGP among the three groups were statistically significant（P<0.05）. Multivariate regression analysis showed that serum dp-ucMGP was an independent predictor of lower extremity arterial stenosis in patients with type 2 diabetic nephropathy， which was independent of age， sex， smoking history，and cardiovascular disease history. Conclusion Serum high level of dp-ucMGP is independently associated with lower extremity arterial stenosis in type 2 diabetic nephropathy patients with ESRD.
[Key words] Nonphosphorylated-uncarboxylated matrix gla protein； Type 2 diabetes mellitus； Diabetic nephropathy； Arterial calcificationendprint
糖尿病肾病是糖尿病最首要的微血管并发症之一，是现在引起ESRD的首要原因之一。ESRD加快血管粥样硬化的发作，下肢动脉狭隘是2型糖尿病ESRD患者动脉钙化首要并发症之一[1-4]。Paul YB等[2]研讨报导承受肾移植患者血清中dp-ucMGP表达添加2型糖尿病心血管疾病的发作。李国刚等[5]报导保持性血液透析患者血中非活性基质gla蛋白（uc-MGP）增高与动脉粥样硬化发作和发展有关。现在国内dp-ucMGP与2型糖尿病ESRD患者下肢动脉钙化的相关报导较少，故本研讨选取2型糖尿病肾病ESRD患者为研讨目标，一切患者均行下肢动脉彩超查看点评下肢动脉狭隘，一起检测患者血清dp-ucMGP水平并点评其与一般材料、试验室目标之间的联系，评论血清dp-ucMGP水平与2型糖尿病肾病ESRD患者下肢动脉狭隘的联系。
1 材料与办法
1.1 临床材料
选取2015年10月～2016年10月在我院内分泌科或许肾内科住院的2型糖尿病肾病ESRD非透析患者106例，其间男65例，平均年纪（56.7±8.3）岁，女41例，平均年纪（58.3±8.9）岁。本研讨均征得患者及家族赞同，并签署知情赞同书。本研讨经赣南医学院榜首隶属医院道德委员会同意。归入规范：（1）年纪18～70岁；（2）2型糖尿病患者，临床契合糖尿病肾病特色或经肾活检确诊糖尿病肾病[5]；（3）契合2007年美国肾脏基金会K/DOQI专家组关于ESRD确诊规范[估量的肾小球滤过率（eGFR）<15 mL/（min·1.73 m2）]，且均未进入保持性透析患者。扫除规范：（1）承受肾脏代替治疗者；（2）预期寿数<6个月；（3）存在急性肾损害患者；（4）活动性炎症性疾病；（5）恶性肿瘤；（6）原发性甲状旁腺功用亢进症；（7）近3个月服用维生素K、维生素K拮抗剂、影响骨代谢等药物者。
1.2 研讨办法
搜集患者的一般材料，包含性别、年纪、身高、体重、糖尿病病程、高血压病程、吸烟史、心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）病史、近3个月有无服用调理钙磷代谢药物等，核算体质指数（body mass index，BMI）。检测一切患者糖化血红蛋白（HbA1c）、肾功用、血钙（Ca）、血磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、C反响蛋白（CRP）、甲状旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）及25羟维生素[D25-hydroxy vitamin D，25（OH）D）]水平。其间血鈣、磷、ALP、LDL-C、CRP均选用全自动生化仪测定（日立7170A，日本）。HbA1c选用全自动糖化血红蛋白剖析仪测定（离子交换高效液相色谱法）（爱科来HA-8180，日本）。血清PTH水平选用化学发光免疫法测定（Achitect i2000sr，美国），血清25（OH）D水平选用电化学发光免疫测定（COBAS E601，瑞士）。详细检测办法均按试验室操作规程和试剂盒说明书要求进行操作。选用双抗体夹心ELISA法检测dp-ucMGP，捕获抗体（一抗）靶向结合非磷酸化的MGP 3-15片段（mAb-dpMGP，Vitak生物公司，荷兰），检测抗体（二抗）靶向结合未羧化的MGP 35-49片段（mAb-ucMGP，Vitak生物公司，荷兰）。详细检测办法均按试验室操作规程和试剂盒说明书要求进行操作。
下肢动脉彩超选用荷兰Philips iu22超声确诊仪，探头频率5～9 MHz，检测双侧股总动脉、股浅动脉、股深动脉、腘动脉、胫前动脉、胫后动脉及足背动脉。依据下肢动脉狭隘程度分组：轻度狭隘组（<50%）、中度狭隘组（50%～69%）、重度狭隘组（70%～99%或阻塞），血管管径狭隘程度选用斑块处血管腔面积与正常血管腔面积百分比点评，以最重侧分级作为终究分级[6]。运用CKD-EPI公式核算eGFR[7]，选用Cockcroft-Gault方程核算eGFR，eGFR={[140-年纪（岁）]×体质量（kg）×88.4/[血肌酐（μmol/L）×72]}×（女人0.85）。当血清白蛋白<40 g/L时，选用校对钙点评血清钙水平[8]。
1.3计算学办法
选用SPSS18.0计算软件进行计算剖析。正态分布计量材料以均数±规范差标明，选用单要素方差剖析或t查验，非正态分布计量材料以中位数（四分位距离）标明，选用秩和查验。计数材料以构成比标明，选用χ2查验。运用Logistic回归剖析判断各相关要素对下肢动脉狭隘及其严峻程度的影响。一切查验均为双侧查验，P<0.05为差异有计算学含义，P<0.01为差异有高度计算学含义。
2 成果
2.1 患者一般材料及试验室目标比较
依据下肢动脉狭隘程度不同将研讨目标分为三组：轻度狭隘组56例、中度狭隘组32例和重度狭隘组18例。三组患者中男性、年纪、吸烟史、心血管疾病病史、血清CRP、血清25（OH）D、血清dp-ucMGP水平差异均有计算学含义（P<0.05）。但是，三组间的糖尿病病程、高血压病程、体质指数、HbA1c、Ca、P、ALP、LDL-C、血清PTH水平差异均未见计算学含义（P>0.05）（表1）。
2.2多要素Logistic回归剖析
多要素回归剖析发现血清dp-ucMGP是2型糖尿病肾病ESRD患者下肢动脉狭隘的独立猜测因子，独立于年纪、性别、吸烟史、心血管疾病病史（表2）。
3 评论
MGP是一种维生素K依赖性的血管壁钙磷堆积及晶体构成的抑制剂[9]。MGP经维生素K 依赖性γ-羧化酶将Gly残基转变为Gla残基而取得活性，γ-羧化和磷酸化均能够调理MGP的活性。现在有许多办法检测各种不同活性方式MGP的表达，其间dp-ucMGP与血管壁钙磷堆积及羟磷灰石的亲和力低，已有文献报导血清中dp-ucMGP是众所周知的反映体内维生素K水平的标志物之一，血清中dp-ucMGP与血管钙化密切相关[10-15]。endprint
本研讨发现2型糖尿病肾病ESRD患者下肢动脉重度狭隘组患者血清dp-ucMGP水平显着高于中度狭隘组，中度狭隘组血清dp-ucMGP水平显着高于轻度狭隘组。多要素Logistic回归剖析进一步发现，血清dp-ucMGP水平与下肢动脉狭隘呈明显正相关，独立于年纪、性别、吸烟史、心血管疾病病史。Dalmeijer GW等[13]研讨指出血清dp-ucMGP与2型糖尿病患者动脉粥样硬化性疾病风险添加密切相关，尤其是外周动脉硬化疾病。本课题组前期选用下肢动脉CTA点评2型糖尿病患者膝下动脉钙化积分，研讨成果提示血清dp-ucMGP水平与2型糖尿病患者膝下动脉钙化积分呈正相关，独立于年纪、性别、心血管疾病病史。Sophie Liabeuf等[16]研讨标明血清中高水平dp-ucMGP与2型糖尿病兼并轻度肾功用不全患者膝下动脉钙化积分独立相关。Leon JS等[17]研讨标明血清dp-ucMGP水平与处于不同阶段的缓慢肾功用衰竭患者主动脉钙化相关，并且独立于预算肾小球滤过率、年纪、性别、CRP等传统风险要素。已有不少动物试验以及临床研讨均标明维生素K拮抗剂的运用能够明显升高血清中dp-ucMGP水平，发作严峻的动脉钙化[18]。Mabel Aoun等[19]前瞻性研讨报导，糖尿病缓慢肾功用衰竭长时间保持性血液透析患者血清dp-ucMGP基线水平在2000 pmol/L左右，弥补维生素K2能够明显下降血清dp-ucMGP水平。Fang-Fei Wei等[20]别离选用免疫组化及von Kossa办法检测糖尿病肾小球微血管非活性未羧化的基质gla蛋白表达水平（uncarboxylated MGP，ucMGP）及钙堆积，与健康人的肾小球微血管相比较，糖尿病患者肾小球微血管ucMGP及钙堆积水平显着添加，但该研讨未评论糖尿病肾病患者肾小球微血管病变部位dp-ucMGP表达状况。
本研讨不足之处包含样本少、试验办法单一，未归入2型糖尿病人群作为正常对照，未选用免疫组化办法检测2型糖尿病动脉钙化部位dp-ucMGP水平以及维生素K的弥补对dp-ucMGP的影响等。但是，本研讨要点报导dp-ucMGP与2型糖尿病肾病ESRD患者下肢动脉狭隘之间的联系。
2型糖尿病肾病ESRD患者血清升高的dp-ucMGP水平与下肢动脉狭隘的严峻性独立相关。因而，血清dp-ucMGP可能是猜测2型糖尿病肾病ESRD患者发作下肢动脉狭隘的有价值的生化标志物之一。怎么反转血清中升高的dp-ucMGP水平以及评论dp-ucMGP与2型糖尿病缓慢肾功用衰竭患者血管钙化之间的联系值得进一步深入研讨。
[參考文献]
[1] Takayasu Ohtake，Machiko Oka，Ryota Ikee，et al. Impact of lower limbs arterial calcification on the prevalence and severity of PAD in patients on hemodialysis[J].Vasc Surg，2011，3（53）：676-683.
[2] Paul YB，Johanna MG，Gozewijn DL，et al. Vitamin K intake and plasma desphospho-uncarboxylated matrix gla-protein levels in kidney transplant recipients[J].Plos One，2012，7（10）：e47991-47999.
[3] Georg Schlieper，Ralf Westenfeld，Thilo Kruger，et al. Circulating nonphosphorylated carboxylated matrix gla protein predicts survival in ESRD[J]. Am Soc Nephrol，2011，2（22）：387-395.
[4] 中华医学会糖尿病学分会微血管并发症学组.糖尿病肾病防治专家一致（2014版）[J].中华糖尿病杂志，2014， 6（11）：792-801.
[5] 李国刚，刘惠兰，段晓峰，等.保持性血液透析患者血清OPN及ucMGP浓度与心血管钙化的联系[J].首都医科大学学报，2009，30（2）：130-132.
[6] 高超杰，华扬，贾凌云.2型糖尿病患者颅内、颈部、下肢动脉粥样硬化性病变的超声研讨[J].中华医学超声杂志，2010，7（10）：1691-1698.
[7] Levey AS，Stevens LA，Schmid CH，et al. A new equation to estimate glomerular filtration rate[J]. Ann Intem Med，2009，9（150）：604-612.
[8] 王莉，李贵森，刘志红，等.中华医学会肾脏病学分会《缓慢肾脏病矿物质和骨反常诊治辅导》[J].肾脏病与透析肾移植杂志，2013，6（22）：554-559.
[9] Shea MK，Holden RM，Vitamin K. Status and vascular calcification：Evidence from observational and clinical studies[J].AdvNutr，2012，3（2）：158-165.
[10] Shea MK，Christopher JO，Donnell CV，et al. Circulating uncarboxylated matrix gla protein is associated with vitamin K nutritional status，but not coronary artery calcium，in older adults[J]. Nutr，2011，8（141）：1529-1534.endprint
[11] Schurgers LJ，Spronk HM，Skepper JN，et al. Post-translational modification sregulate matrix gla protein function：Importance for inhibition of vascular smooth muscle cell calcification[J]. Thromb Haemost，2007，5（12）：2503-2511.
[12] Leon JS，Kirsten JF，Marjo HJ，et al. Novel conformation-specific antibodies againstmatrix -carboxyglutamic acid（Gla）protein undercarboxylated matrix gla protein as marker for vascular calcification[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005，2（25）：1629-1633.
[13] Dalmeijer GW，Vander SY，BarretoFC，et al. Matrixgla protein speciesandriskof cardiovascular events in type 2 diabetic patients[J]. Diabetes Care，2013，11（36）：3766-3771.
[14] Solberg OG，Vermeer C，Schurgers LJ，et al. Undercarboxylated matrix Gla protein is associated with indices of heart failure and mortality in symptomatic aortic stenosis[J].Intern Med，2010，11（268）：483-492.
[15] Hermans MM，Vermeer C，Schurgers LJ，et al. Undercarboxylated matrix gla protein levels are decreased in dialysis patients and related to parameters of calcium-phosphate metabolism and aortic augmentation index[J]. Blood Purif，2007，9（259）：395-401.
[16] Sophie Liabeuf，Bourron Olivier，Cees Vemeer，et al. Vascular calcification in patients with type 2 diabetes：The involvement of matrix Gla protein[J]. Cardiovascular Diabetology，2014，4（13）：885-891.
[17] Leon JS，Barreto DV，Barreto FC，et al. The circulating inactive form ofmatrixgla protein is a surrogate marker for vascular calcification in chronic kidneydisease：A preliminary report[J]. Clin Am Soc Nephrol，2010，5（4）：568-575.
[18] Liv M Vossen，Leon J Schurgers，Bernard Jvan Varik，et al. Menaquinone-7 Supplementation to Reduce Vascular Calcification in Patients with Coronary Artery Disease： Rationale and Study Protocol（VitaK-CAC Trial）[J]. Nutrients，2015，7（11）： 8905-8915.
[19] Mabel Aoun，Maha Makki，Hiba Azar，et al. High Dephosphorylated-Uncarboxylated MGP in Hemodialysis patients：Risk factors and response to vitamin K2，A pre-post intervention clinical trial[J]. BMC Nephrology，2017， 7（18）：191-200.
[20] Fang-Fei Wei，Nadja EA Drummen，Lutgarde Thijs，et al. Vitamin-K-Dependent Protection of the Renal Microvasculature：Histopathological Studies in Normal and Diseased Kidneys[J].Pulse，2016，8（24）：85-91.
（收稿日期：2017-10-27）endprint