乙型肝炎病毒dna正常值 ELISA法和GIGA法测定乙型肝炎病毒血清标志物的比较研讨

何英爱++++++姚叶林

[摘要]意图 评论金标快速检测板法（GIGA法）检测乙型肝炎病毒血清标志物五项的成果精确性。办法 选取2016年3月1～31日于我院产科门诊进行“母婴筛查”的患者357例，其待测血清标本一起选用ELISA（酶联免疫吸附法）和GIGA进行检测，对两种办法检测成果的共同性进行办法学剖析。成果 357例血清标本中，286例GIGA法与ELISA法5项成果彻底相符，总契合率达80.11%，71例成果不彻底共同。选用ELISA法检测，HBsAg阳性成果的标本36例中，GIGA法有1例患者没有检出。定论 乙肝五项血清标志物的成果GIGA法比ELISA法精确性稍低，但GIGA法操作简洁、快速，易于查询成果，且GIGA法中HBsAg检测成果与ELISA法根本共同，适用于急诊手术前以及献血前的快速筛查。

[关键词]乙型肝炎病毒；血清标志物；酶联免疫吸附实验；金标快速检测板

[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）03（c）-0135-04

[Abstract]Objective To explore the GIGA method detect hepatitis B virus serum accuracy of the results of the five makers.Methods 357 patients joined the "maternal and infant screening.jpg" >

[Key words]HBV；Serum markers；ELISA；GIGA

我国是乙型肝炎病毒感染率较高的国家之一，很多学者[1-6]报导我国人口HBsAg阳性率为9.8%～15.28%。现在，临床多运用HBsAg、HBsAb以及HBeAg等乙肝五项对乙型肝炎作出临床确诊，这几种免疫学标志物的检测办法有多种，常用的有酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光免疫剖析技能（CLIA）和金标快速检测板法（GIGA）[7]。ELISA用于乙肝五项的测定，其灵敏度相对偏高，且有较高的特异性，已被广泛使用于临床查验。GIGA办法操作比较简洁，耗时短，无需运用其他仪器。关于急诊或者是人群筛查，尤为适用[8]。因而，本研讨对在我院进行筛查的357例血清标本运用ELISA法及GIGA法一起进行检测，比较剖析两种办法的检测成果，评论临床标本运用GIGA法检测乙肝五项的牢靠性，现报导如下。

1材料与办法

1.1一般材料

选取2016年3月1～31日于我院产科门诊行“母婴筛查”的患者357例，研讨方案经过医院医学道德委员会赞同，患者知情赞同并签署了知情赞同书。

1.2试剂与仪器

1.2.1试剂 ELISA法试剂盒，均由中山生物工程有限公司供给，对乙型肝炎病毒血清标志物五项进行检测；质控品，源自广东省临床查验中心。GIGA法运用英科新创（厦门）科技有限公司乙肝五项查看卡。两种办法试剂均按阐明书要求保存，运用前从冰箱取出，恢复至室温，均在有用期内运用。

1.2.2仪器 科华生物ST-360全自动酶标仪，全自动快速立式洗板机。

1.3办法

一切患者均在空腹状态下抽取静脉血，4000 r/min离心5 min，将别离的血清保存待检，溶血标本要求重抽标本。

1.3.1 ELISA法 由专人依据试剂盒里面的阐明进行操作。别离对HBsAg、HBsAb以及HBeAg样本相应的D（450 nm）值进行测定核算；若S/CO≥阴性对照孔×2.1，标明成果为阳性；相反，则为阴性；对HBeAb、HBcAb样本相应的D（450 nm）值进行测定，若S/CO≥阴性对照孔均值×0.5，标明成果为阴性；相反，则标明成果為阳性。

1.3.2 GIGA法 依据试剂盒标示的阐明进行规范操作。测验卡，均挑选胶体金免疫技能：于加样区中掺加样品，15 min后对成果进行查看，若>30 min，标明成果无效。质控区（C）呈现紫红色条带，标明此测验板有用，层析进程契合正常规范，且标本量满意；若质控区（C）无显着条带呈现，原因或许是此测验板无效或失效，标本量缺乏，或层析进程不契合正常规范，应弃用此无效测验板，并运用新的测验板从头测验。HBsAg、HBsAb、HBeAg检测验纸区中，测验区（T）若呈现紫红色条带，则为阳性；若无紫红色条带，则为阴性。HBeAb以及HBcAb试纸区，若测验区（T）未见紫红色条带，标明成果为阳性；若呈现紫红色条带，则为阴性。

1.4统计学办法

选用SPSS 19.0统计学软件进行数据剖析，计量材料数据用均数±规范差（x±s）标明，两组间比较选用t查验；计数材料用率标明，组间比较选用χ2查验，以P<0.05为差异有统计学含义。

2成果

2.1乙肝五项GIGA法和ELISA法检测成果

357例经过GIGA法、ELISA法别离对乙肝五项一起进行检测，有286例乙肝五项的成果彻底契合，总契合率达80.11%。71例成果不彻底相符。按形式的惯性次序：HBsAg为1，HBsAb为2，HBeAg为3、HBeAb为4，而HBcAb为5，顺次对阳性成果作出断定。两种检测办法查看的乙肝五项成果比较，差异有统计学含义（P<0.05）（表1）。

2.2乙肝五项各项目标GIGA法与ELISA法检测成果比较

对HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb五项的检测成果别离进行单项比较，ELISA法检测为阴性的标本，GIGA法根本为阴性，阴性契合率除HBsAb外，其他4项均在90.00%以上。在阳性契合率方面，HBcAb体现差点，契合率仅为64.56%，阐明有部分阳性标本会漏检（表2）。

3评论

比较剖析的357例标本中，286例标本两办法检测五项成果彻底契合，契合率达80.11%，剖析阳性成果形式比较，发现两办法成果差异有统计学含义（P<0.05），或许是因为两种办法检测原理的差异。ELISA法结合了酶联免疫吸附原理，凭借酶催化底物所发作的生物扩大效果，使抗原抗体反响有更强的灵敏度，其特异性相对杰出，有不错的重复性。而GIGA法则是选用胶体GIGA记技能和蛋白质层析技能，胶体金是氯酸金在还原剂效果下，聚合成巨细为1～100 nm的金颗粒所构成的疏水胶溶液，抗原或者是抗体蛋白，在胶体金颗粒成功吸附的状态下，便可发生GIGA抗原或者是抗体（也就是免疫金）。胶体金若要显色，必定需有浓度高的符号物，并且金颗粒要到达满意的直径，其灵敏度才干合格，然后导致其检测灵敏度遭到必定约束[9]。有研讨标明[10]，GIGA法检测HBsAg的灵敏度为1 ng/ml，而ELISA法检测的灵敏度显着高于GIGA法，为0.5 ng/ml。剖析本次研讨成果可知，两办法检测10例大三阳（1，3，5）成果彻底共同，18例小三阳（1，4，5）成果GIGA法有2例未检出，其间1例GIGA法未检出HBsAg。此外，36例HBsAg阳性标本中，GIGA法仅此1例未检出。或许原因为标本中HBsAg浓度较低，导致GIGA法漏检。

剖析本次研讨成果后发现，HBsAb阴性契合率最低，GIGA法与ELISA法比较阴性契合率只要77.90%。在以往标本检测中发现，GIGA法检测HBsAb敏感性显着低于ELISA法，关于ELISA法检测显色浅的标本，运用GIGA法检测常未能在断定成果的限制时刻内检出，或是测验区条带显色过浅，肉眼难以查询。故关于ELISA法检测HBsAb显色浅的标本，不宜用GIGA法复检，可运用ELISA法从头检测，或直接用化学发光法复核。有研讨剖析标明[11]，ELISA顶用双抗原夹心法和双抗体夹心法检测进行检测时，选用二步法能有用下降“钩状效应”的呈现，进步阳性率。一起也可挑选有很高的灵敏度、线性规模相对宽的酶免疫剖析技能（CLEIA）或者是电化学发光剖析（ECLIA）对其进行复查。HBcAb的阳性契合率也较低，才64.56%，GIGA法检出率较低或许是因为HBcAb的检测运用的是竞赛抑制法，标本阳性时测验区（T）无条带呈现，若标本中HBcAb浓度低，测验区（T）或许会呈现与质控区（C）条带比较色彩稍浅的条带，肉眼查询难以分辩。也或许是直接用原血清进行检测导致的，将来用1∶30的稀释血清进一步进行研讨，再另行报导。HBeAb阴性契合率虽较高，到达97.00%，但阳性契合率才70.59%，形成GIGA法有10例阳性标本漏检，或许原因与HBcAb类似，两者相同运用竞赛抑制法。运用ELISA法检测时，用酶标仪比色断定成果，相对GIGA法愈加精确，漏检率较低。但有2例标本的HBcAb GIGA法检测为阳性而ELISA法为阴性，因为ELISA法检测HBcAb时，需要对样品进行稀释，反响孔中参加约50 μl生理盐水和5 μl待测血清样品，标本量参加不宜过多，若标本中HBcAb浓度低，经稀释后检测或许会呈现假阴性成果。查询表2其他项目GIGA法与ELISA法检测成果根本相符，HBsAg陰性契合率为99.69%，阳性契合率为97.22%，与学者刘珊等[14-15]的研讨共同。HBeAg阴性阳性契合率均为100.00%，契合临床查验的需求。

乙肝是我国常见的流行症，乙肝五项的检测关于防备乙肝的感染有十分重要的效果。在现阶段临床实验室中，ELISA法能很好地习惯检测的要求，检测灵敏度高、特异性强、精确性好。相较于Q-PCR技能，ELISA法对乙肝五项进行查看，其精确性略高但未见太大差异。有研讨也说到：关于隐匿性HBV感染，ELISA法相较于荧光定量PCR，在敏感性上略差[12]。不过，ELISA法改善和复检，有助于提高检出的阳性率。在临床实践中，关于ELISA法检测置疑假阴性标本，复检依然阴性者，可经过化学发光法或电化学发光法进行定量剖析，或进行HBV-DNA剖析，判别成果。本次研讨中，ELISA法阳性检出率显着高于GIGA法，漏检率低。在以往实践中，ELISA法检测乙肝五项精确性较高，假阴性成果较少，检测成果较为牢靠。

近些年，GIGA法有比较显著的开展。作为操作简略的检测技能，GIGA法无需供给完善的实验条件，对操作人员也没有严厉的要求，无需其他共同的仪器设备，试剂相对安稳，在临床查验上运用广泛。本实验得知：GIGA法在对乙肝五项进行检测时，其精确性以及灵敏度相较于ELISA法均有必定的下风。针对HBsAb、HBcAb两项目标，ELISA法远优于GIGA法，且GIGA法本钱较ELISA法高。结合实验进程和实验成果剖析，GIGA法根本适用于急诊手术前少数标本的检测，快速得出开始筛查成果，对医护人员因工作露出感染HBV进行防备，但不能以初筛成果作为确诊，需要用ELISA法或其他灵敏度及精确性更好的办法进行复查确证。若要检测批量的标本，或是要求精确性较高的检测，运用ELISA法较GIGA法好。

GIGA法还常用于献血前对进行HBsAg的快速筛查。HBsAg检测是在献血进程中防备HBV的一线屏障，高敏感性的挑选实验关于削减输血相关的HBV感染的危险非常重要。本次实验中，GIGA法检测HBsAg的契合率高，与ELISA法比较较敏感性相差不远，漏检率低，能满意献血前的HBsAg快速筛查的要求。运用GIGA法对献血者进行快速筛查除了能削减献血前的HBV感染危险，还利于乙肝的前期发现确诊，检测的阳性成果能够在采血现场向献血者反应 ，然后让献血者能够在当地医疗机构作出诊治[13]。

对乙肝五项进行检测时，GIGA法的精确性略低于ELISA法，存在必定的漏检率，但GIGA法在操作过程、实验仪器、检测时刻方面较ELISA法简略快速，用作开始筛查检测成果较为牢靠。GIGA法适用于急诊标本以及献血前的快速筛查，也可用于一般健康体检或流行病学的查询，对维护医护人员的安全以及防备HBV的感染有重要的效果。

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