益母草生物碱 正交实验优选益母草生物碱的提取工艺研讨

王婧怡+高尚

[摘要]意图 优化益母草生物碱的最佳提取工艺，为其进一步开发供给理论基础。办法 选用L9（34）正交试验法，以生物碱总量为判别规范，调查冷浸提取法中酸浓度、乙醇浓度、浸提时刻、浸提次数对生物碱总量的影响。成果 益母草总生物碱的最佳提取工艺为70%乙醇提取2次，每次40 min，0.10 mol/L的盐酸溶解。定论 本研讨所树立的最佳提取工艺简洁、经济、可行。

[关键词]正交试验；益母草；生物碱；提取工艺

[中图分类号] R944.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）09（c）-0004-03

Study on extraction technology of Motherwort alkaloids by orthogonal test

WANG Jing-yi1 GAO Jie2

1.Mesothecium，Luoyang City Institute for Food and Drug Control in Henan Province，Luoyang 471000，China；2.Department of Pharmacy，Zhengzhou Railway Vocational and Technical College，Zhengzhou 450000，China

[Abastract]Objective To select the optimum extraction technology of Motherwort alkaloids.Methods L9（34） orthogonal test was used.The total alkaloids was dectected as the criterion to investigate the effect of acid concentration，ethanol concentration，extraction time and extraction times on total alkaloids in cold-dipping extraction.Results The optimum extraction technology was 70% ethanol concentration，extracted two times，40 minutes each time，dissolved with 0.10 mol/L Hydrochloric acid.Conclusion The optimum method is Simple，economical and feasible.

[Key words]Orthogonal test；Motherwort；Alkaloids；Extraction technology

益母草原名茺蔚，为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的地上部分，始载于《神农本草经》，具有活血祛瘀、舒肝调经、利尿退肿的成效[1]。益母草具有抗心肌缺血、抗炎镇痛等药理效果[2-8]。研讨标明发挥以上药理效果的物质基础是益母草总生物碱，首要包含益母草碱和水苏碱等[9-12]。

本文选用正交试验法对益母草总生物碱进行回流提取，研讨了酸浓度、乙醇浓度、浸提时刻、浸提次数等要素对提取成果的影响，以期断定最佳的提取工艺，为益母草总生物碱的批量出产供给理论基础。

1仪器与试药

1.1仪器

FY130中草药破坏机（上海书培试验设备有限公司）；FA2104A电子剖析天平（上海精天电子仪器有限公司）；RE52AA型旋转蒸腾仪（北京成萌伟业科技有限公司）；A390紫外可见分光光度计（上海翱艺仪器有限公司）；HH-SZ1-6电热恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂）。

1.2试药

益母草购自河南本草国药馆连锁有限公司，经判定为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的地上部分；盐酸水苏碱对照品（我国药品生物检定所）；雷氏盐（我国药品生物检定所）；无水乙醇、雷氏盐、丙酮、盐酸均为剖析纯。

2办法与成果

2.1预处理

益母草经处理去除表层泥沙，天然晒干，烘箱中60℃烘6 h至恒重。破坏后过40目筛，得益母草粉末备用。

2.2对照品的制备

精细称取枯燥恒重的盐酸水苏碱对照品50 mg，加0.10 mol/L盐酸溶解，稀释搬运制50 ml容量瓶中，摇匀定容至刻度（终浓度为1 mg/ml）。从中别离精细汲取0、1、3、5、7、9 ml置于25 ml容量瓶中，再别离向内精细参加新制的2%硫氰酸铬铵溶液3 ml，摇匀，加0.1 mol/L盐酸溶液定容至刻度，过滤。取滤液在520 nm波利益测定吸光度，以盐酸溶液作空白对照，以吸光度值A为纵坐标，规范品浓度C为横坐标制作规范曲线[13]，线性回归方程为：A=0.9425C+0.02，r=0.9901。

2.3样品溶液的制备

称取枯燥至恒重的益母草粉末5.00 g左右，参加100 ml乙醇溶液浸泡，依照规划好的条件进行浸提，提取后取出过滤，蒸干滤液得提取物粉末，用20 ml既定浓度的盐酸溶液溶解并过滤。用同浓度的盐酸洗刷，定容至100 ml，得样品溶液。

2.4提取条件规划

调查酸浓度、乙醇浓度、浸提时刻、浸提次数等要素对浸提效果的影响，寻求各要素最佳提取工艺条件，依据单要素试验成果各取3个水平进行L9（34）正交试验。

2.5单要素试验

2.5.1酸浓度的调查 取益母草粉末5.00 g左右，共5份，参加95%乙醇溶液100 ml浸提30 min，浸提3次，兼并滤液并过滤，蒸干滤液得提取物粉末，别离加0.00、0.05、0.10、0.15、0.20 mol/L的盐酸溶液溶解过滤定容至100 ml，即得。按“2.2”项下过程测定，在520 nm处测定浸提液吸光度，核算总生物碱的含量作为提取目标。成果在上述酸浓度下益母草生物碱的提取率别离为0.34%、0.42%、0.58%、0.53%、0.48%。成果标明，益母草总生物碱提取率跟着酸浓度的升高而逐步添加，酸浓度在0.10 mol/L益母草总生物碱提取率最高，酸浓度>0.10 mol/L益母草总生物碱提取率随酸浓度升高而下降。因而，提取中酸浓度不宜过高或过低，本次正交试验挑选酸浓度为0.05、0.10、0.15 mol/L三个水平。

2.5.2乙醇浓度的调查 取益母草粉末5.00 g左右，共5份，别离参加50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液100 ml浸提30 min，浸提3次，兼并滤液并过滤，蒸干滤液得提取物粉末，加0.10 mol/L盐酸溶液溶解过滤定容至100 ml，即得。按“2.2”项下过程测定，在520 nm处测定浸提液吸光度，核算总生物碱的含量作为提取目标。成果在上述乙醇浓度下益母草生物碱的提取率别离为0.43%、0.51%、0.67%、0.59%、0.52%。成果标明，乙醇体积分数为60%～80%时，益母草生物碱提取率较高，体积分数为70%时益母草总生物碱提取率最高，>70%时益母草生物碱提取率随体积分数的升高而下降。因而，提取中乙醇的体积分数不宜过高或过低，本次正交试验挑选酸浓度为60%、70%、80%三个水平。

2.5.3浸提时刻的调查 取益母草粉末5.00 g左右，共5份，参加70%乙醇溶液100 ml别离浸提10、20、30、40、50 min，浸提3次，兼并滤液并过滤，蒸干滤液得提取物粉末，加0.10 mol/L的盐酸溶液溶解过滤定容至100 ml，即得。按“2.2”项下过程测定，在520 nm处测定浸提液吸光度，核算总生物碱的含量作为提取目标。成果在上述浸提时刻下益母草生物碱的提取率别离为0.49%、0.57%、0.64%、0.65%、0.66%。成果标明，益母草总生物碱提取率跟着提取时刻的延伸而逐步添加，提取时刻为30 min时益母草总生物碱提取率最高，提取时刻>30 min时益母草总生物碱提取率随时刻延伸而趋于安稳。因而，结合实际出产的效益，本次正交试验挑选浸提时刻为20、30、40 min三个水平。

2.5.4浸提次数的调查 取益母草粉末5.00 g左右，共5份，参加70%乙醇溶液100 ml浸提30 min，别离浸提1、2、3、4、5次，兼并滤液并过滤，蒸干滤液得提取物粉末，参加0.10 mol/L液溶解过滤定容至100 ml，即得。按“2.2”项下过程测定，在520 nm处测定浸提液吸光度，核算总生物碱的含量作为提取目标。成果在上述浸提次数下益母草生物碱的提取率别离为0.42%、0.55%、0.62%、0.67%、0.68%。成果标明，益母草总生物碱提取率跟着浸提次数的添加而逐步添加，浸提次数为3次时益母草总生物碱提取率最高，提取次数>3次时益母草总生物碱提取率随次数的添加而趋于安稳。因而，结合实际出产的效益，本次正交试验挑选浸提次数为2、3、4次三个水平。

2.6正交试验

结合单要素试验的调查成果，选取影响益母草总生物碱提取功率的酸浓度、乙醇浓度、浸提时刻、浸提次数要素中有含义的三个水平进行试验，剖析成果以断定最佳的提取工艺。要素水平见表1。L9（34）正交试验规划、试验成果及方差剖析见表2、表3。由成果可知影响要素的巨细次序酸浓度>乙醇浓度>浸提次数>浸提时刻，最佳水平为A2B2C3D1，因而益母草总生物碱的最佳提取工艺为70%乙醇提取2次，每次40 min，0.10 mol/L的盐酸溶解。

2.7验证试验

为了断定正交试验断定的条件是否为最佳工艺，称取3份益母草药材粉末，如表4所示，依照“3.2”断定的A2B2C3D1条件进行了3次重复性试验，成果益母草生物碱的含量为别离为0.684%，0.681%，0.702%，平均值为0.689%，RSD为1.648%，标明该提取条件安稳可行，具有重现性和安稳性，提取工艺为70%乙醇提取2次，每次40 min，0.10 mol/L的盐酸溶解为益母草生物碱的最佳提取工艺。

3评论

现在，关于益母草生物碱的研讨[14-16]逐年增多，益母草文献中报导，益母草总生物碱的提取办法有微波提取法、表面活性剂超声提取法、煎煮法、浸渍法等[17-19]。有研讨选用大孔吸附树脂水洗脱液别离纯化得到的总生物碱操作简洁、经济[20]。本试验选用单要素和正交试验规划，优化冷浸法提取益母草总生物碱的工艺，成果标明最佳提取工艺为A2B2C3D1，即70%乙醇提取2次，每次40 min，0.10 mol/L的盐酸溶解，得率为0.69%。其间酸浓度对试验成果的影响最大，其次别离是乙醇浓度、浸提次数、浸提时刻。本研讨所树立的最佳提取工艺简洁、经济、可行，值得推广使用。

[参考文献]

[1]张雪，宋玉琴，杨雨婷，等.益母草活血化瘀化学成分与药理效果研讨进展[J].药物点评研讨，2015，38（2）：214-217.

[2]刘绍龑，白明，纪晓宁，等.益母草总碱对小鼠前列腺增生模型的影响[J].我国试验方剂学杂志，2011，17（21）：177-180.

[3]雷玲，李力，俞丽丽，等.益母草注射液与缩宫素对子宫缩复效果的随机对照研讨[J].重庆医学，2014，43（2）：152-154.

[4]胡耀昌，方宏勋，禹志領，等.益母草反转口腔癌细胞多药耐药效果[J].时珍国医国药，2012，23（11）：2900-2902.

[5]黄庆芳，冯承恩.益母草对小鼠子宫平滑肌双向调节效果研讨[J].亚太传统医药，2014，10（14）：11-13.

[6]郑师明，严鹏科，李世煌，等.精制益母草生物碱提取纯化工艺研讨[J].我国药房，2010，21（15）：1370-1373.

[7]赵彩霞，蔡长春，张增巧，等.益母草的药理效果及临床使用研讨进展[J].临床误诊误治，2011，24（2）：82-84.

[8]陶宏征，沈云玫，白建波，等.益母草研讨进展[J].有用中医药志，2014，30（6）：585-587.

[9]贺春晖，赵懿清，李霞，等.益母草碱药理效果的分子机制研讨进展[J].我国临床药理学与治疗学，2013，18（12）：1419-1423.

[10]陈刘庆.益母草药理效果及临床使用研讨进展[J].我国社区医生（医学专业），2012，14（34）：41-42.

[11]张雪，宋玉琴，杨雨婷，等.益母草活血化瘀化学成分与药理效果研讨进展[J].药物点评研讨，2015，38（2）：214-217.

[12]赵红，李世民，窦立雯，等.益母草生物碱药理毒理学研讨进展[J].我国药物戒备，2015，12（12）：722-726.

[13]袁王俊，张维瑞，李勉，等.不同产地益母草中总生物碱含量的比较[J].河南大学学报（医学版），2013，32（1）：38-39.

[14]彭湘君，李尚春，李银保，等.益母草中生物碱的提取、别离、判定试验[J].试验室研讨与探究，2014，33（6）：33-35.

[15]黎耀东，贾芸，卢军，等.种类、产地及采收期对野生益母草中生物碱成分的影响[J].中成药，2011，33（10）：1764-1767.

[16]陈秀杰，段秀君，焦太雨，等.吸附剂对益母草生物碱含量测定的影响[J].我国民族民间医药，2014，23（1）：17，19.

[17]陆强.呼应面法优化益母草中总生物碱提取工艺[J].中医药导报，2011，17（12）：72-74.

[18]赵鹂，郭圣荣.表面活性剂-超声法提取益母草总生物碱[J].科技导报，2008，26（13）：80-83.

[19]付君叶，宋秋华.使用超声法从益母草中提取总生物碱的研讨[J].江西理工大学学报，2012，33（1）：18-20.

[20]李雪丽，李静雅，刘晓芳，等.SP825树脂别离纯化益母草总黄酮和总生物碱的研讨[J].中心民族大学学报：天然科学版，2012，21（1）：28-31.

（收稿日期：2016-06-10 本文修改：方菊花）