小儿先天性心脏病的体现：22q11.2微缺失伴先天性心脏病的确诊技术研究
蒋华景+陈静+林丽璇
[摘要]意图 评论荧光原位杂交技能（FISH）联合超声心动图对确诊22q 11.2微缺失伴先天分心脏病的临床价值。办法 于2013年1月～2014年12月挑选62名具有高危妊娠指征的孕妈妈，运用FISH技能检测22q 11.2微缺失，并以超声心动图明晰确诊。成果FISH检出5例22q 11.2微缺失，超声心动图查看成果3例为法洛四联症，2例为室间隔残缺。57例无22q 11.2微缺失的胎儿超声心动图查看成果三尖瓣轻度反流2例、肺动脉狭隘2例、动脉导管未闭1例。22q 11.2微缺失组与无微缺失组胎儿超声心动图表现反常率别离为100.00%和8.77%，差异有统计学含义（χ2=28.28，P<0.01）。定论FISH技能检测胎儿22q 11.2微缺失，并合作超声心动图对心脏变形进行明晰查看，临床运用价值较高，值得推广运用。
[关键词]荧光原位杂交技能；超声心动图；22q 11.2微缺失；先天分心脏病
[中图分类号] 714.43+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）05（c）-0062-04
[Abstract]Objective To discuss the clinical value of fluorescence in situ hybridization （FISH） combined with ultrasonic cardiogram on 22q 11.2 microdeletion accompanied with congenital heart disease （CHD）.Methods A total of 62 high risk pregnant women from January 2013 to December 2014 were chosen.The FISH technique was applied to detect 22q 11.2 microdeletion，and ultrasonic cardiogram was used to diagnose clearly.Results Five fetuses with 22q 11.2 microdeletion were detected，from whom 3 fetuses were diagnosed as tetralogy of Fallot，and 2 fetuses were diagnosed as ventricular septal defect.The ultrasonic cardiogram showed that 2 fetuses with tricuspid regurgitation slightly，2 fetuses with pulmonary stenosis and 1 fetus with patent ductus arteriosus were detected in 57 fetuses without 22q 11.2 microdeletion.Abnormality rate in group with 22q 11.2 microdeletion and group without 22q 11.2 microdeletion was 100.00% and 8.77% respectively，and difference was statistically significant （χ2=28.28，P<0.01）.Conclusion Detecting 22q 11.2 microdeletion with FISH technique and diagnosing clearly CHD with ultrasonic cardiogram has high clinical application value and it is worthy of clinical promotion and application.
[Key words]Fluorescence in situ hybridization；Ultrasonic cardiogram；22q 11.2 microdeletion；Congenital heart disease
先天分心臟病（congenital heart disease，CHD）是临床常见的胎儿先天分变形，发病率为活产婴儿的3‰～8‰[1]，也是现在婴幼儿逝世的首要病因之一。CHD的发病受遗传和环境等多种要素影响，现在研讨标明，染色体22q 11.2微缺失与CHD关系密切，22q 11.2微缺失可以引发心脏缺点，一起伴有唇裂/腭裂、胸腺发育不良、面庞反常等先天变形，因而被称为22q 11.2微缺失综合征。22q 11.2微缺失综合征作为人类最常见的染色体缺失综合征之一，发病率为1/4 000～1/6 000[2]，且75%～80%的22q 11.2微缺失微缺失病例可兼并各种类型的CHD[3-5]。本研讨选用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技能，对临床疑似妊娠22q 11.2微缺失综合征胎儿的高危孕妈妈进行产前检测22q 11.2基因微缺失，并以五颜六色超声心动图明晰确诊，旨在对胎儿进行前期干涉，并进步22q 11.2微缺失伴先天分心脏病的确诊技能。
1目标与办法
1.1研讨目标
挑选2013年1月～2014年12月在本院产前查看并检测22q 11.2微缺失的高危孕妈妈62例，孕妈妈年纪28～43岁，均匀（36.35±4.62）岁，胎龄13～33周，均匀（23.64±4.28）周。根据妊娠周数，11～14周行绒毛穿刺3例，17～24周行羊膜腔穿刺23例，>24周行脐带血穿刺36例。62名孕妈妈以往均引产或临产过CHD或唇腭裂等面部变形胎儿。一切研讨目标均签署知情赞同书，研讨获医院道德委员会赞同。
1.2 试剂与仪器
FISH确诊试剂盒（购自北京金菩嘉医疗科技有限公司），胶原酶B、RNase A酶、胃蛋白酶（均购自美国Sigma公司）。国产长风恒温水浴箱、奥林巴斯BX51型荧光显微镜。
1.3 FISH检测
根据孕龄取羊水10 ml、脐血2 ml或绒毛3～4枝，选用FISH确诊试剂盒，对标本22号染色体TUPLE1基因的微缺失进行检测。GLP TUPLE1/GLP ARSA为待检测的基因，TUPLE1：22q 11和ARSA：22q 13为探针的位点，其荧光信号别离为桔红色和绿色，互相互为内对照探针。严厉按试剂盒阐明进行操作，别离进行滴片、枯燥、变性、杂交、后洗、染色和镜检等操作。假如TUPLEl探针与22q 11.21成功杂交，显现桔红色的荧光信号（四甲基罗丹明）；假如ARSA基因探针与22q 13.31成功杂交，则呈现绿色的荧光信号（细胞绿）。TUPLE1和ARSA基因互为内对照。在奥林巴斯BX51型荧光显微镜下对杂交信号进行调查，运用FISH VIDEOTEST 2.0软件剖析。FISH信号的点评规矩：有用标本为细胞膜完好且细胞杂交率80%，对每份样本随机剖析100个处于割裂中期状况的细胞，22号染色体在细胞内呈绿色荧光，假如22q 11无缺失，22号染色体上应该还可显现2个桔红色荧光信号；假如只要1个桔红色荧光信号，提示22q 11.2存在微缺失。若荧光信号正常的细胞≥90%，则胎儿染色体可确诊正常；若荧光信号反常的割裂状况细胞>60%，FISH查看成果阳性，提示胎儿存在22q 11.2微缺失。
1.4超声心动图查看
参照“ISUOG 胎儿心脏筛查攻略”[6]，超声确诊仪为GE E8型。承认胎儿心脏方位后，在胎儿腹部横切面，根据下腔静脉、胃、腹主动脉等结构对心脏方位是否正常进行判别；然后用超声心动图对胎儿三血管气管的横截面、三血管的横截面、左右室流出道的横截面及四腔心横截面筛查胎儿CHD。
1.5统计学办法
数据选用SPSS 18.0统计学软件进行剖析，计数材料选用χ2查验，并选用配对McNemar查验比较两种确诊办法的差异，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1 FISH 法检测22q 11.2微缺失成果
62例高危孕妈妈中，共57例FISH检测成果为>90%的细胞内有2个绿色荧光、2个桔红色荧光信号，提示22q 11.2无微缺失。5例有60%以上细胞呈现了2个绿色荧光、1个桔红色荧光信号，提示存在22q 11.2微缺失。
2.2 超声心动图成果
5例22q 11.2微缺失胎儿超声心动图查看成果3例为法洛四联症（图1），2例为室间隔残缺。而57例无22q 11.2微缺失的胎儿超声心动图查看成果三尖瓣轻度反流2例、肺动脉狭隘2例、动脉导管未闭1例，22q 11.2微缺失胎儿超声心动图表现为100.00%反常，而无22q 11.2微缺失的胎儿超声心动图表现反常率为8.77%，两组差异有统计学含义（χ2=28.28，P<0.01）（表1）。FISH和超声心动图确诊成果的配对χ2查验显现2种办法对胎儿心脏反常确诊的差异无统计学含义（χ2=5.00，P=0.06）（表2）。在FISH检测成果和超声心动图成果出来后，关于确诊为法洛四联症的3例胎儿，在孕妈妈及其家族赞同的状况下行引产手术，其他胎儿在征得孕妈妈及其家族的赞同下均活产，随访结局状况见表3。
3评论
CHD的发病率近年来呈增高趋势，但其发病机制现在仍未彻底明晰。大部分观念以为CHD是受遗传和环境影响的多基因遗传病，其间染色体畸变是呈现CHD的首要病因，胎儿发育进程中极细微的染色体畸变也能使邻近的基因呈现反常，并使心脏以及心外器官的发育受到影响，然后呈现CHD和心变形。而22q11.2微缺失综合征是现在少量得到承认的致CHD的染色体畸变之一。Hartman等[7]的研讨显现CHD患儿中22q 11.2微缺失的发作率为12.2%。22q 11.2微缺失首要为染色体减数割裂之后重组时发作的反常与不对称导致，微缺失巨细为1.5～3 Mb，缺失区域处于D22S306/308与D22S427/1638间。活产儿中22q 11.2的发作率约为1/4 000[8]。22q 11.2微缺失综合征现已被承以为在外唐氏综合征的导致CHD的最为多见的遗传要素。22q 11.2微缺失综合征患者临床表现为CHD、唇腭裂、面部变形、免疫缺点等，而CHD中发作率较高的首要为法洛四联征、主动脉弓离断、室间隔残缺、一起动脉干等，患儿的生长发育、学习认知才能都会呈现反常或缓慢[9-11]，对其预后和日子质量带来严峻的晦气影响。
研讨显现22q 11.2微缺失综合征的首要致病基由于TUPLE1基因，它的畸变或缺失是引起CHD的首要原因之一[12]。FISH技能经过特异性探针与细胞杂交对TUPLE1基因进行检测，能对胎儿是否发作22q 11.2 微缺失进行精确的确诊。FISH检测不需要细胞培养，能适用于细胞周期的各个时期，具有标本收集后可当即检测的长处，能在染色体原位显色，定位精准直观，成果判别时只需对细胞进行计数、辨认是否有杂交信号，具有高度的灵敏性和特异度，成为临床染色体微缺失检测的金规范之一[13]。
染色体反常与胎儿的发育变形，特别是CHD的发作密切相关。心脏超声查看可以明晰直观地显现胎儿心脏图画，经过将胎儿心脏的扫查切面从四腔心切面扩展到更多的规范切面，使心脏变形的检出率大为进步，因而超声心动图是确诊胎儿CHD的牢靠办法[14-15]。染色体畸变常伴基因反常或缺失，因而，心脏变形或心外变形较为多發。研讨显现CHD胎儿的染色体反常发作率为25%～30%，而当兼并有心外变形时染色体反常发作率可高达40%[16]。经过产前的FISH查看对胎儿进行22q 11.2微缺失的检测，并结合心脏超声印象学查看，对进步CHD的产前确诊有明显的临床含义。本研讨对62例高危孕妈妈进行FISH检测，检出5例22q 11.2微缺失，22q 11.2微缺失胎儿的超声心动图均显现有心脏变形，其间法洛四联症3例，室间隔残缺2例；而57例无22q 11.2微缺失的胎儿超声心动图查看心脏变形率为8.77%，两组差异有统计学含义，阐明22q 11.2微缺失与胎儿CHD的发作有较大的相关性，与闫亚妮等[17]的研讨类似，一起也提示CHD是环境要素与多基因遗传一起影响的成果，CHD的病因还需更深化的研讨。运用FISH技能检测22q 11.2微缺失，所需样本量少、且操作简洁，具有灵敏度高、特异性强的特色。跟着标记技能和探针制备的开展，FISH技能对临床胎儿CHD检测的运用价值将进一步得到表现[16]。
本研讨显现，对高危孕妈妈进行FISH检测以筛查22q 11.2微缺失，并结合超声心动图查看以明晰确诊，以削减和防止22q 11.2微缺失综合征的患儿出世，下降围生儿病死率，提高人口素质，值得临床进一步推广运用。
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（收稿日期：2017-04-25 本文修改：许俊琴）