细胞免疫荧光过程 免疫荧光层析定量检测体系的改善研讨
张超+刘艳珍
[摘要] 针对韩国i-Chroma免疫荧光剖析仪定量检测体系的光路规划、试剂条卡壳、电机驱动电路进行开始改善研讨，并介绍了一种两用的微量取样办法。开始检测试验成果表明，改善体系在大幅下降本钱以及优化反响体积后，并未对检测精确度发生影响，光路及光电池的替换还对检测精细度方针进步供给了技能支撑。这些改善计划为开宣布满意临床运用需求的新式POCT检测体系奠定了根底。
[关键词]免疫荧光层析法；荧光检测光路；层析试剂条卡壳；步进电机驱动芯片；微量取样器
[中图分类号] TH776 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）23-157-05
免疫荧光层析法是一种依据层析技能和免疫荧光剖析相结合的快速检测办法。行将荧光染料颗粒作为示踪符号物用于抗原抗体反响，当待测溶液中抗原与试纸条上抗体发作反响后，运用激起光照耀试纸条上检测区域依据灵敏物质浓度巨细而呈现不同的荧光强度，经过与剖析物校准曲线比较即可得到待测溶液中方针物质浓度的检测成果[1-2]。现在国内外运用此技能已相继研宣布比如韩国i-Chroma体系等自动化检测体系[3]，其典型全体结构如图1所示。由于具有本钱低价、方便快捷、便于定量等特色，此类干式免疫荧光层析法已被广泛地运用在食品药品、水质监测，特别是临床惯例测定等范畴。
一般用于定量检测，所以荧光强度现已超出肉眼可辨认规模，而且荧光检测波长一般较为单一，检测时还要过滤掉掺杂在其间的激起光，所以适用于胶体金类的肉眼可视的，比对规范色卡或RGB图画剖析之类的办法在荧光检测中并不适用[4-6]。本研讨针对韩国i-Chroma体系仪器及配套免疫荧光层析试剂条本钱较高，运用过程中连续发现的一些问题，尝试着对此检测体系进行改善，侧重对光路规划、层析试剂条结构规划、核算机控制与信号收集、标本取样与反响等进行了开始剖析讨论与优化研讨。
1 光路规划
免疫荧光层析条光学原理如图2所示，当赤色激起光照耀在层析试剂条上后，结合的荧光符号物从激起光获取能量改变而宣布荧光被光学传感器接纳，光学传感器将光信号的强弱改变成为电信号的改变。图中可见免疫荧光层析试剂条上一般有两条结合线，别离为反响检测线与质控线，所以其需求在运动中进行扫描检测。
在对韩国i-Chroma体系的光学体系进行深入研讨根底上，本研讨推出了一种光路规划计划（图3）。此光路规划与韩国i-Chroma体系大致相同，都是选用了二向分色片，使得照耀到层析试剂条上检测线的激起光与被检测荧光光路在同一方位上，处理了2套光路不同体而导致的方位差异。二向分色片在此结构上的运用原理为：右侧的激起光照耀在呈45°角放置的二向分色片上，此刻二向分色片相关于激起光来说即相当于反射镜，所以激起光经二向分色片反射而由一水平光改变为呈90°向下的光经透镜聚集直接照耀在光路下方的荧光层析试剂条上。经激起光照耀而发生的荧光由下往上经过呈45°角放置的二向反射镜，由于荧光与激起光波长不同，所以此刻二向反射镜关于荧光来说相当于通明玻璃，使得荧光能够直接穿透二向反射镜继续向上经透镜聚集照耀在光学检测器上。
检测荧光的强弱除了与荧光示踪物结合数量有关也与激起光强弱有关，所以此规划能够有用的防止因方位差而导致的荧光强度差异，能更精确的使荧光光强反映出抗原抗体的结合强度，而防止激起光改变所带来的荧光强度改变搅扰。
为了进一步下降本钱并进步体系检测的灵敏度，本研讨针对韩国i-Chroma体系光路规划的两个当地进行改善，一个是加长了激起光圈套，由于二向分色片尽管从原理上说关于激起光相当于反射镜，可是仍是会有少部分激起光会穿透二向分色镜在内部构成漫反射，而有或许会被上方的荧光检测传感器所接纳到，这一现象在低强度荧光检测时尤为显着，所以加长了激起光圈套一则延长了激起光光程，二则有满足的空间能够在内部填充吸光资料经过这两个途径一起效果最大程度的削减漫反射，一起也下降了对二向分色片的技能要求，然后下降了本钱。
别的将荧光检测传感器的类型改善为日本滨松的S1133，该光电池光谱功用可见图4。
可见此光电池波长规模可达1000nm以上，灵敏度能够高达0.5A/W，也就是说此光电池的选用能够拓展荧光示踪符号物的挑选规模，而且取得更高的检测灵敏度。另一个原因，由于该光电池的选用使得撤销韩国i-Chroma体系光路中光电池前部的光阑小孔的规划成为或许，该小孔的意图是由于原光电池质量比较一般，为了取得更好的信噪比而设置的，但在实践出产中如此小的光阑出产工艺本钱要求较高。本研讨由于替换光电池的类型使得出产难度与本钱下降，而且撤销了光阑使得被检测荧光能够直接到达S1133使光通量增大，因而改善也进步了本检测体系的检测灵敏度。
2 试剂条卡壳规划
由于韩国i-Chroma体系免疫荧光层析试剂条需求别离检测两个不同方位的检测线（反响检测线与质控线），这就需求一套机械传动组织来合作光路体系来完成检测扫描作业。可是现在免疫荧光层析试剂条卡壳多为如图5外形。
该类试剂条卡壳外形为长方体，其自身结构并不适合于机械传动，所认为合作使其具有光学扫描功用，一般会规划一个试剂条载物台，然后将试剂条刺进到载物台上，实践机械体系是驱动载物台进行扫描动作，再由载物台承载试剂条进行同步扫描动作。由于试剂条卡壳自身没有什么固定设备，这就使得配套的试剂载物台机械规划较为杂乱，所以本研讨在韩国i-Chroma体系根底上规划出一种新式试剂条卡壳，其外形结构如图6。
在该规划上能够看到，前方多出了个试剂条沟槽，使得在机械规划上只需配套一个拉勾就能够完成试剂条的前后扫描动作。
图7为试剂条卡壳前视图，此规划不同于一般卡壳之长方形规划，而是选用了上下外径不对等的规划预留了限位槽方位，这样结合了沟槽与限位槽就能够撤销了运用于此POCT设备中试剂条载物架的要求，然后简化了机械部分的杂乱关系，然后又能够合作检测光路进行免疫荧光层析试剂条的扫描功用。endprint
3 电机驱动电路
一个安稳高精度的机械运动渠道是免疫荧光层析定量检测体系扫描收集荧光信号的必要组件。依据对韩国i-Chroma体系的步进电机电路的研讨发现，它选用的步进电机驱动芯片为Allegro公司的SLA7024，该芯片为：驱动二相6线步进电机，最大驱动电流为1.5A的一个直插驱动芯片，在对其技能方针进行剖析并结合POCT类仪器小型化的要求后，找出了两个问题。
一可见该部件电机的方框图见图8。
依据方框图能够发现该芯片为半桥驱动，电机驱动电压来自与VBB脚所衔接的电源，驱动管只要下拉才能，所以使得其运用规模只能为6线2相步
进电机，而国内两相步进电机多为4线，而且相同技能方针下6线电机本钱比4线电机高，现在逐渐退出商场，原因之一或许是韩国i-Chroma体系由于规划上市时刻较早的原因，而没有选用更经济的运用时刻相对较晚的2相4线步进电机。
再查技能方针，该芯片只支撑2细分驱动，也就是说按当时干流2相步进电机步距角多为1.8度，2细分驱动的情况下最高精度为1.8/2=0.9度。在扫描剖析中精细的扫描精度是需求精细的机械组织作为支撑的，假如电机旋转视点精度不高，则需求更为杂乱机械结构去补足这一缺点，这也许是韩国i-Chroma体系选用试剂条载物台机械结构的原因之一。
针对以上两点缺点在本研讨将驱动芯片类型改为了日本三洋的LV8731，它的方框图可见图9。
在图上可视每相驱动管比SLA7024均多了一倍，使其具有上下拉才能，因而该芯片运用规模更广，既能够运用2相6线电机也能够运用2相4线电机，而且不管是配套电机价格仍是芯片价格均比i-Chroma计划低。在细查该芯片技能方针，该芯片驱动电流为2A，相当于SLA7024驱动才能1.5A的0.75倍。而且支撑8细分，相同依照1.8度电机进行核算，步距角最高能够到1.8/8=0.225度，也就是说在运用相同电机的情况下LV8731驱动的旋转精度是SLA7024的4倍，这样就更有利于收集到分辨率更高的荧光图谱，关于免疫荧光层析试剂条来说直接进步了检测灵敏度。
因而，本研讨主张能够运用LV8731芯片直接替换掉SLA7024以进步本检测体系的机械技能方针，别的比较了2种芯片的实践物理尺度后，LV8731的实践尺度远小于SLA7024，这样该芯片的选用不只进步了机械技能方针也更有利于POCT类设备小型化的要求。两者的物理尺度图可参阅图10、11。
4 标本上样
加样精确度关于定量免疫剖析成果的精确性也是非常重要的要素，而POCT类产品的运用除此以外还要求便利性。而现在临床选用的不管微量移液器仍是毛细采血管均只能考虑精确性或便利性两个方面之一。在韩国i-Chroma体系中有一个共同的加样设备，经研讨这是一个兼容上述两种要求的一个不错的计划。结构图见图12。
如图所示，它的底部为一毛细管，但中部有漏气的方形开口，所以当它与液体标本触摸时，由于毛细现象会导致标本沿吸样端向上爬高，而毛细管的内径与长度决议了吸样量，这样就简化了操作过程，增加了便利性，而且吸样量的精度也得到了确保，当将它刺进试剂瓶后然后再倒置，假如揉捏试剂瓶瓶内试剂能够从滴注端被挤出，所以此取样器一物两用，是个不错的微量取样规划思路值得引荐。
5 试验成果剖析
运用主CPU输出脉冲驱动步进电机进行旋转，然后经过机械设备并结合试剂条将步进电机的旋转运动转化为直线前后运动，在运动的一起激起光继续点亮照耀荧光层析试剂条，光学传感器继续接纳将光强信号改变为电流信号，经过前置放大器的I/V转化电路将电流信息改变为电压信号，然后由主CPU中内置的AD转化器将电压信号改变为16bit数字信号贮存，然后经过通讯端口将数字信号上传至PC机。
将PC机收到的数字信号作为Y轴，由于层析试剂条为匀速直线运动，所以将整个检测区间等分为1000等分，将对应的1000个Y轴数据进行描图制作即得到图13荧光散布图形。
Y轴表明的为荧光强度，单位为RLU（relative light unit），X轴即表明荧光层析试剂条检测窗扫描规模的1000个等份。图上标明的三条条竖线左边两条间区域即为反响检测线区间，右侧两条间区域为质控检测线区间。
将反响检测线区间面积叠加成果一般命名为T峰面积，质控检测线去区间面积叠加成果一般命名为C峰面积，然后将T峰面积除以C峰面积得到的即为T/C值，将不同结合强度的抗原抗体反响扫描所得到的T/C值进行比较剖析，能够用于对本检测计划之技能功用方针进行点评。而且在非检测线空白区域没有呈现激起光搅扰现象，空白曲线较为滑润信噪比较高具有有用查验价值。
将韩国 i-Chroma体系作为比对体系进行剖析，本改善体系运用韩国i-Chroma 体系的CRP试剂条卡壳中的试剂裸条拆出，放入到本计划的试剂条卡壳中，将英国RANDOX公司的CRP规范物参加到内嵌了韩国i-Chroma体系裸条的本改善体系试剂条卡壳中，然后运用改善的光路进行激起与荧光扫描别离得到对应的CRP浓度与T/C值成果见表1。
由上述成果可见T/C值与CRP反响浓度呈正向相关，能够经过该检测设备所检测到的荧光RLU值推算出CRP抗原抗体的结合强度。将CRP浓度与T/C值运用3次多项式法拟合后得到如下求值公式：y=3E-05x3 -0.0034x2+0.1133x-0.4224，核算相关系数r为 0.9992。
将CRP国际规范物质 ERM-DA474、CRP质控物别离参加韩国i-Chroma体系原装试剂条与内嵌裸条的改善体系试剂卡壳中，然后将原装试剂条运用韩国i-Chroma体系仪器读数检测，本改善体系卡壳放入本检测体系中别离进行检测[4]，所检测的T/C值带入上述之3次多项式公式中进行成果换算，ERM-DA474用于精确度试验成果比较见表2，CRP质控物用于精细度试验成果比较见表3。
从表2能够发现本改善体系在精确度方面与韩国i-Chroma体系两者无显著性差异，均契合一般检测质量技能要求。精细度方面，从表3可见本改善体系关于韩国i-Chroma体系而言，检测精细度有显着的改善。
在对韩国i-Chroma体系进行深入研讨根底上，本研讨经过对免疫荧光层析试剂条的检测光路、试剂条卡壳、电路、荧光图谱制作等进行了改善与研讨，供给了一种客观合理的剖析办法，而且具有必定的实践运用根底，这为往后在此根底之上参加必定的人机界面、规范曲线贮存等功用，规划开宣布一种老练的依据免疫荧光层析法的快速免疫定量剖析仪奠定了必定作业根底。
[参阅文献]
[1] 刘婷婷，屈渲婷.荧光免疫层析试剂条定量检测仪的研发[J].现代电子技能，2013，36（15）：195-198.
[2] 刘翔，杜民，李玉榕.荧光免疫层析定量检测体系的规划与完成[J].电子丈量与仪器学报，2013，27（9）：859-866.
[3] 邓芳梅，林晓文，李德发.i-CHROMA^TM READER免疫荧光剖析仪功用点评[J].临床输血与查验，2010，12（2）：107-109.
[4] 王帅，郑德智.定量胶体金试剂条浓度检测办法[J].北京航空航天大学学报，2009，35（8）： 942-945.
[5] 何小维，赵喜红.胶体金快速确诊技能的研讨进展[J].中国人兽共患病学报，2007，23（1）：86-88.
[6] Kim Suhyeon，Park Je-Kyun.Development of a Test Strip Reader for a Lateral Flow Membrane-based Immuno-chromatographic Assay[J].Biotechnology and Bioprocess Engineering，2004，9（2）：127-131.
（收稿日期：2014-10-15）endprint
3 电机驱动电路
一个安稳高精度的机械运动渠道是免疫荧光层析定量检测体系扫描收集荧光信号的必要组件。依据对韩国i-Chroma体系的步进电机电路的研讨发现，它选用的步进电机驱动芯片为Allegro公司的SLA7024，该芯片为：驱动二相6线步进电机，最大驱动电流为1.5A的一个直插驱动芯片，在对其技能方针进行剖析并结合POCT类仪器小型化的要求后，找出了两个问题。
一可见该部件电机的方框图见图8。
依据方框图能够发现该芯片为半桥驱动，电机驱动电压来自与VBB脚所衔接的电源，驱动管只要下拉才能，所以使得其运用规模只能为6线2相步
进电机，而国内两相步进电机多为4线，而且相同技能方针下6线电机本钱比4线电机高，现在逐渐退出商场，原因之一或许是韩国i-Chroma体系由于规划上市时刻较早的原因，而没有选用更经济的运用时刻相对较晚的2相4线步进电机。
再查技能方针，该芯片只支撑2细分驱动，也就是说按当时干流2相步进电机步距角多为1.8度，2细分驱动的情况下最高精度为1.8/2=0.9度。在扫描剖析中精细的扫描精度是需求精细的机械组织作为支撑的，假如电机旋转视点精度不高，则需求更为杂乱机械结构去补足这一缺点，这也许是韩国i-Chroma体系选用试剂条载物台机械结构的原因之一。
针对以上两点缺点在本研讨将驱动芯片类型改为了日本三洋的LV8731，它的方框图可见图9。
在图上可视每相驱动管比SLA7024均多了一倍，使其具有上下拉才能，因而该芯片运用规模更广，既能够运用2相6线电机也能够运用2相4线电机，而且不管是配套电机价格仍是芯片价格均比i-Chroma计划低。在细查该芯片技能方针，该芯片驱动电流为2A，相当于SLA7024驱动才能1.5A的0.75倍。而且支撑8细分，相同依照1.8度电机进行核算，步距角最高能够到1.8/8=0.225度，也就是说在运用相同电机的情况下LV8731驱动的旋转精度是SLA7024的4倍，这样就更有利于收集到分辨率更高的荧光图谱，关于免疫荧光层析试剂条来说直接进步了检测灵敏度。
因而，本研讨主张能够运用LV8731芯片直接替换掉SLA7024以进步本检测体系的机械技能方针，别的比较了2种芯片的实践物理尺度后，LV8731的实践尺度远小于SLA7024，这样该芯片的选用不只进步了机械技能方针也更有利于POCT类设备小型化的要求。两者的物理尺度图可参阅图10、11。
4 标本上样
加样精确度关于定量免疫剖析成果的精确性也是非常重要的要素，而POCT类产品的运用除此以外还要求便利性。而现在临床选用的不管微量移液器仍是毛细采血管均只能考虑精确性或便利性两个方面之一。在韩国i-Chroma体系中有一个共同的加样设备，经研讨这是一个兼容上述两种要求的一个不错的计划。结构图见图12。
如图所示，它的底部为一毛细管，但中部有漏气的方形开口，所以当它与液体标本触摸时，由于毛细现象会导致标本沿吸样端向上爬高，而毛细管的内径与长度决议了吸样量，这样就简化了操作过程，增加了便利性，而且吸样量的精度也得到了确保，当将它刺进试剂瓶后然后再倒置，假如揉捏试剂瓶瓶内试剂能够从滴注端被挤出，所以此取样器一物两用，是个不错的微量取样规划思路值得引荐。
5 试验成果剖析
运用主CPU输出脉冲驱动步进电机进行旋转，然后经过机械设备并结合试剂条将步进电机的旋转运动转化为直线前后运动，在运动的一起激起光继续点亮照耀荧光层析试剂条，光学传感器继续接纳将光强信号改变为电流信号，经过前置放大器的I/V转化电路将电流信息改变为电压信号，然后由主CPU中内置的AD转化器将电压信号改变为16bit数字信号贮存，然后经过通讯端口将数字信号上传至PC机。
将PC机收到的数字信号作为Y轴，由于层析试剂条为匀速直线运动，所以将整个检测区间等分为1000等分，将对应的1000个Y轴数据进行描图制作即得到图13荧光散布图形。
Y轴表明的为荧光强度，单位为RLU（relative light unit），X轴即表明荧光层析试剂条检测窗扫描规模的1000个等份。图上标明的三条条竖线左边两条间区域即为反响检测线区间，右侧两条间区域为质控检测线区间。
将反响检测线区间面积叠加成果一般命名为T峰面积，质控检测线去区间面积叠加成果一般命名为C峰面积，然后将T峰面积除以C峰面积得到的即为T/C值，将不同结合强度的抗原抗体反响扫描所得到的T/C值进行比较剖析，能够用于对本检测计划之技能功用方针进行点评。而且在非检测线空白区域没有呈现激起光搅扰现象，空白曲线较为滑润信噪比较高具有有用查验价值。
将韩国 i-Chroma体系作为比对体系进行剖析，本改善体系运用韩国i-Chroma 体系的CRP试剂条卡壳中的试剂裸条拆出，放入到本计划的试剂条卡壳中，将英国RANDOX公司的CRP规范物参加到内嵌了韩国i-Chroma体系裸条的本改善体系试剂条卡壳中，然后运用改善的光路进行激起与荧光扫描别离得到对应的CRP浓度与T/C值成果见表1。
由上述成果可见T/C值与CRP反响浓度呈正向相关，能够经过该检测设备所检测到的荧光RLU值推算出CRP抗原抗体的结合强度。将CRP浓度与T/C值运用3次多项式法拟合后得到如下求值公式：y=3E-05x3 -0.0034x2+0.1133x-0.4224，核算相关系数r为 0.9992。
将CRP国际规范物质 ERM-DA474、CRP质控物别离参加韩国i-Chroma体系原装试剂条与内嵌裸条的改善体系试剂卡壳中，然后将原装试剂条运用韩国i-Chroma体系仪器读数检测，本改善体系卡壳放入本检测体系中别离进行检测[4]，所检测的T/C值带入上述之3次多项式公式中进行成果换算，ERM-DA474用于精确度试验成果比较见表2，CRP质控物用于精细度试验成果比较见表3。
从表2能够发现本改善体系在精确度方面与韩国i-Chroma体系两者无显著性差异，均契合一般检测质量技能要求。精细度方面，从表3可见本改善体系关于韩国i-Chroma体系而言，检测精细度有显着的改善。
在对韩国i-Chroma体系进行深入研讨根底上，本研讨经过对免疫荧光层析试剂条的检测光路、试剂条卡壳、电路、荧光图谱制作等进行了改善与研讨，供给了一种客观合理的剖析办法，而且具有必定的实践运用根底，这为往后在此根底之上参加必定的人机界面、规范曲线贮存等功用，规划开宣布一种老练的依据免疫荧光层析法的快速免疫定量剖析仪奠定了必定作业根底。
[参阅文献]
[1] 刘婷婷，屈渲婷.荧光免疫层析试剂条定量检测仪的研发[J].现代电子技能，2013，36（15）：195-198.
[2] 刘翔，杜民，李玉榕.荧光免疫层析定量检测体系的规划与完成[J].电子丈量与仪器学报，2013，27（9）：859-866.
[3] 邓芳梅，林晓文，李德发.i-CHROMA^TM READER免疫荧光剖析仪功用点评[J].临床输血与查验，2010，12（2）：107-109.
[4] 王帅，郑德智.定量胶体金试剂条浓度检测办法[J].北京航空航天大学学报，2009，35（8）： 942-945.
[5] 何小维，赵喜红.胶体金快速确诊技能的研讨进展[J].中国人兽共患病学报，2007，23（1）：86-88.
[6] Kim Suhyeon，Park Je-Kyun.Development of a Test Strip Reader for a Lateral Flow Membrane-based Immuno-chromatographic Assay[J].Biotechnology and Bioprocess Engineering，2004，9（2）：127-131.
（收稿日期：2014-10-15）endprint
3 电机驱动电路
一个安稳高精度的机械运动渠道是免疫荧光层析定量检测体系扫描收集荧光信号的必要组件。依据对韩国i-Chroma体系的步进电机电路的研讨发现，它选用的步进电机驱动芯片为Allegro公司的SLA7024，该芯片为：驱动二相6线步进电机，最大驱动电流为1.5A的一个直插驱动芯片，在对其技能方针进行剖析并结合POCT类仪器小型化的要求后，找出了两个问题。
一可见该部件电机的方框图见图8。
依据方框图能够发现该芯片为半桥驱动，电机驱动电压来自与VBB脚所衔接的电源，驱动管只要下拉才能，所以使得其运用规模只能为6线2相步
进电机，而国内两相步进电机多为4线，而且相同技能方针下6线电机本钱比4线电机高，现在逐渐退出商场，原因之一或许是韩国i-Chroma体系由于规划上市时刻较早的原因，而没有选用更经济的运用时刻相对较晚的2相4线步进电机。
再查技能方针，该芯片只支撑2细分驱动，也就是说按当时干流2相步进电机步距角多为1.8度，2细分驱动的情况下最高精度为1.8/2=0.9度。在扫描剖析中精细的扫描精度是需求精细的机械组织作为支撑的，假如电机旋转视点精度不高，则需求更为杂乱机械结构去补足这一缺点，这也许是韩国i-Chroma体系选用试剂条载物台机械结构的原因之一。
针对以上两点缺点在本研讨将驱动芯片类型改为了日本三洋的LV8731，它的方框图可见图9。
在图上可视每相驱动管比SLA7024均多了一倍，使其具有上下拉才能，因而该芯片运用规模更广，既能够运用2相6线电机也能够运用2相4线电机，而且不管是配套电机价格仍是芯片价格均比i-Chroma计划低。在细查该芯片技能方针，该芯片驱动电流为2A，相当于SLA7024驱动才能1.5A的0.75倍。而且支撑8细分，相同依照1.8度电机进行核算，步距角最高能够到1.8/8=0.225度，也就是说在运用相同电机的情况下LV8731驱动的旋转精度是SLA7024的4倍，这样就更有利于收集到分辨率更高的荧光图谱，关于免疫荧光层析试剂条来说直接进步了检测灵敏度。
因而，本研讨主张能够运用LV8731芯片直接替换掉SLA7024以进步本检测体系的机械技能方针，别的比较了2种芯片的实践物理尺度后，LV8731的实践尺度远小于SLA7024，这样该芯片的选用不只进步了机械技能方针也更有利于POCT类设备小型化的要求。两者的物理尺度图可参阅图10、11。
4 标本上样
加样精确度关于定量免疫剖析成果的精确性也是非常重要的要素，而POCT类产品的运用除此以外还要求便利性。而现在临床选用的不管微量移液器仍是毛细采血管均只能考虑精确性或便利性两个方面之一。在韩国i-Chroma体系中有一个共同的加样设备，经研讨这是一个兼容上述两种要求的一个不错的计划。结构图见图12。
如图所示，它的底部为一毛细管，但中部有漏气的方形开口，所以当它与液体标本触摸时，由于毛细现象会导致标本沿吸样端向上爬高，而毛细管的内径与长度决议了吸样量，这样就简化了操作过程，增加了便利性，而且吸样量的精度也得到了确保，当将它刺进试剂瓶后然后再倒置，假如揉捏试剂瓶瓶内试剂能够从滴注端被挤出，所以此取样器一物两用，是个不错的微量取样规划思路值得引荐。
5 试验成果剖析
运用主CPU输出脉冲驱动步进电机进行旋转，然后经过机械设备并结合试剂条将步进电机的旋转运动转化为直线前后运动，在运动的一起激起光继续点亮照耀荧光层析试剂条，光学传感器继续接纳将光强信号改变为电流信号，经过前置放大器的I/V转化电路将电流信息改变为电压信号，然后由主CPU中内置的AD转化器将电压信号改变为16bit数字信号贮存，然后经过通讯端口将数字信号上传至PC机。
将PC机收到的数字信号作为Y轴，由于层析试剂条为匀速直线运动，所以将整个检测区间等分为1000等分，将对应的1000个Y轴数据进行描图制作即得到图13荧光散布图形。
Y轴表明的为荧光强度，单位为RLU（relative light unit），X轴即表明荧光层析试剂条检测窗扫描规模的1000个等份。图上标明的三条条竖线左边两条间区域即为反响检测线区间，右侧两条间区域为质控检测线区间。
将反响检测线区间面积叠加成果一般命名为T峰面积，质控检测线去区间面积叠加成果一般命名为C峰面积，然后将T峰面积除以C峰面积得到的即为T/C值，将不同结合强度的抗原抗体反响扫描所得到的T/C值进行比较剖析，能够用于对本检测计划之技能功用方针进行点评。而且在非检测线空白区域没有呈现激起光搅扰现象，空白曲线较为滑润信噪比较高具有有用查验价值。
将韩国 i-Chroma体系作为比对体系进行剖析，本改善体系运用韩国i-Chroma 体系的CRP试剂条卡壳中的试剂裸条拆出，放入到本计划的试剂条卡壳中，将英国RANDOX公司的CRP规范物参加到内嵌了韩国i-Chroma体系裸条的本改善体系试剂条卡壳中，然后运用改善的光路进行激起与荧光扫描别离得到对应的CRP浓度与T/C值成果见表1。
由上述成果可见T/C值与CRP反响浓度呈正向相关，能够经过该检测设备所检测到的荧光RLU值推算出CRP抗原抗体的结合强度。将CRP浓度与T/C值运用3次多项式法拟合后得到如下求值公式：y=3E-05x3 -0.0034x2+0.1133x-0.4224，核算相关系数r为 0.9992。
将CRP国际规范物质 ERM-DA474、CRP质控物别离参加韩国i-Chroma体系原装试剂条与内嵌裸条的改善体系试剂卡壳中，然后将原装试剂条运用韩国i-Chroma体系仪器读数检测，本改善体系卡壳放入本检测体系中别离进行检测[4]，所检测的T/C值带入上述之3次多项式公式中进行成果换算，ERM-DA474用于精确度试验成果比较见表2，CRP质控物用于精细度试验成果比较见表3。
从表2能够发现本改善体系在精确度方面与韩国i-Chroma体系两者无显著性差异，均契合一般检测质量技能要求。精细度方面，从表3可见本改善体系关于韩国i-Chroma体系而言，检测精细度有显着的改善。
在对韩国i-Chroma体系进行深入研讨根底上，本研讨经过对免疫荧光层析试剂条的检测光路、试剂条卡壳、电路、荧光图谱制作等进行了改善与研讨，供给了一种客观合理的剖析办法，而且具有必定的实践运用根底，这为往后在此根底之上参加必定的人机界面、规范曲线贮存等功用，规划开宣布一种老练的依据免疫荧光层析法的快速免疫定量剖析仪奠定了必定作业根底。
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（收稿日期：2014-10-15）endprint