丁基苯酞石药集团 当归中一个新苯酞类化合物

牛研+王书芳

[摘要] 当归为伞形科植物当归Angelicae sinensis的枯燥根，是一味常见中药材。该研讨通过正相硅胶色谱和反相制备液相色谱等办法，从当归中别离出6个化合物，包含1个新化合物；依据理化性质和波谱数据，别离判定为洋川芎内酯H-7-乙酸酯（1）、邻苯二甲酸（2）、邻苯二甲酸二异丁酯（3）、阿魏酸对羟基苯乙醇酯（4）、阿魏酸（5）和阿魏酸松柏酯（6），其间1为新化合物。

[关键词] 当归；苯酞类；洋川芎内酯H-7-乙酸酯

[收稿日期] 2013-10-28

[基金项目] 国家“严重新药创制”科技严重专项（2011ZX09307-002-01）

[通讯作者] *王书芳，Tel：（0571）88208426，E-mail：wangsf@zju.edu.cn

[作者简介] 牛研，Tel：15167145060，E-mail：niuyan1026@163.com

当归为伞形科植当归Angelica sinensis（Oliv.）Diels的枯燥根，别号秦归、云归、西当归、岷当归。始载于《神农本草经》，具有补血调血、调经止痛的成效，临床上首要医治血虚萎黄，晕厥心悸，月经不调，风湿痹痛等[1]。到目前为止，当归中报导的化合物首要包含苯酞类、香豆素类、黄酮类以及有机酸类等[2]。为进一步清晰当归的药效物质，本试验对当归的化学成分进行研讨，选用正相硅胶色谱和反相制备液相色谱等办法从中别离得到6个化合物，别离为洋川芎内酯H-7-乙酸酯（1）（图1）、邻苯二甲酸（2）、邻苯二甲酸二异丁酯（3）、阿魏酸对羟基苯乙醇酯（4）、阿魏酸（5）和阿魏酸松柏酯（6），其间化合物1为新化合物。

图1 化合物1首要HMBC（H→C）相关信号

Fig.1 The key HMBC correlation of compound 1（H→C）

1 资料

Bruker AV-500型核磁共振仪（Bruker BioSpin公司）；Agilent 1100型高效液相，配有自动进样器、柱温箱和光电二极管阵列检测器（PDA），Finnigan LCQ DECA XP^Plus质谱仪（Thermo Finnigan， USA），配有电喷雾离子源（IT）；Buchi 688型中压液相色谱系统（Buchi公司）；制备液相Agilent 1100型色谱仪（Agilent公司），制备柱为Zorbax SB-C₁₈（21.2 mm×250 mm，7 μm）（Agilent公司）；常压柱色谱和薄层色谱硅胶为青岛海洋化工厂出产。

当归药材采自甘肃岷县，经浙江大学药学院陈柳蓉副教授判定为伞形科植物当归A. sinensis的枯燥根，样本存放于浙江大学药物信息学研讨所（110901）。

2 提取别离

将当归根（8 kg）破坏后，选用95%乙醇渗漉，提取液减压浓缩得到总浸膏。总浸膏用水混悬后，顺次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等体积萃取3次。收回溶剂，石油醚部分得浸膏170 g，乙酸乙酯部分得浸膏60 g。石油醚浸膏（170 g）常常压硅胶柱色谱别离，乙酸乙酯-石油醚梯度洗脱（0∶300～1∶0）得10部分（Fr.1～Fr.10），Fr.5（15.5 g）再经硅胶柱色谱别离，乙酸乙酯-石油醚梯度洗脱（1∶200～1∶0）得9部分（Fr.5a～Fr.5i）。Fr.5g通过制备液相制备，流速为10 mL·min^-1，活动相为乙腈-水，梯度为0～40 min，20%～70%乙腈，40～70 min，70%～100%乙腈，终究得到化合物1（t_R=28.5 min，3.2 mg），2（t_R= 34.5 min，3.3 mg）。乙酸乙酯浸膏（60 g）常常压硅胶柱色谱别离，乙酸乙酯-石油醚梯度洗脱（1∶300～1∶0）得10部分（Fr.Ⅰ～ Fr.Ⅹ）。Fr.Ⅶ（2.6 g）再次经硅胶柱色谱别离，石油醚-二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱（10∶1∶0～0 ∶1∶1），得10部分（Fr.Ⅶa～Fr.Ⅶj），Fr.Ⅶd进行制备液相别离，流速为10 mL·min^-1，活动相为乙腈-水，梯度为0～40 min，20%～70%乙腈，41～70 min，70%～100%乙腈，终究得到化合物3（t_R= 55.0 min，11.8 mg）。Fr.Ⅶe进行制备液相别离，流速为10 mL·min^-1，活动相为甲醇-水，梯度为0～70 min，10%～100%甲醇，71～80 min，100%甲醇，终究得到化合物4（t_R=51.5 min，6.1 mg）。Fr.Ⅷ经制备液相制备，流速为10 mL·min^-1，活动相为甲醇-水，梯度为0～60 min，10%～100%甲醇，61～70 min，100%甲醇，终究得到化合物5（t_R= 31.2 min，223.8 mg），6（t_R= 46.3 min，37.8 mg）。

3 结构判定

化合物1 黄色油状物；LC-Q-TOF-MS m/z 289.106 3 [M+Na]⁺（核算值289.105 2，差错-3.83×10^-6），断定其分子式为C₁₄H₁₈O₅；ESI-MS m/z 267 [M+H]⁺；[α]¹⁹_D+4.4（c 0.625，CH₃OH）；IR（KBr）ν_max 3 423，2 959，2 926，2 854，1 750，1 459，1 377，1 230，1 027 cm^-1，显现有羟基、甲基、亚甲基和α， β-不饱和内酯等基团；¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）δ：5.56～5.53（2H，m，H-7，8），4.00（1H，m，H-6），2.60（2H，m，H-4），2.36（2H，m，H-9），2.07（3H，s，H-13），1.95（2H，m，H-5），1.54（2H，m，H-10）和0.97（3H，t，J=7.4 Hz，H-11），上述氢谱数据显现有2个甲基、4个亚甲基和3个次甲基信号；¹3C-NMR（CD₃OD，125 MHz）δ：171.8（C-12），169.5（C-1），157.1（C-3a），149.6（C-3），123.3（C-7a），115.5（C-8），68.6（C-6），67.7（C-7），29.1（C-9），26.7（C-5），23.2（C-10），20.8（C-13），18.6（C-4），14.1（C-11），结合DEPT谱（CD₃OD，125 MHz）显现该化合物有14个碳信号，其间，高场区有2个甲基碳和4个亚甲基碳信号，δ 67.66和δ 68.62为2个连氧次甲基碳信号、低场区显现有1个双键CH信号、3个双键季碳信号和2个羰基碳信号δ 169.5，171.8，结合碳谱信息，能够看出氢谱低场区δ 4.00（1H，m）为1个连氧次甲基质子信号，δ 5.56～5.53（2H，m）为1个连氧次甲基质子和1个双键质子信号。化合物1的碳谱与洋川芎内酯H[3]的碳谱数据根本类似，仅仅多了1个乙酰基信号，其HMBC谱中有乙酰羰基碳和H-7的相关峰，标明C-7位羟基被乙酰化（图1）。CD（CH₃OH）275（Δε-12.88）nm，参考文献[4]，揣度该化合物肯定构型为6R，7S。归纳以上数据，化合物1判定为洋川芎内酯H-7-乙酸酯。endprint

化合物2 白色粉末；ESI-MS m/z 165[M-H]^-；¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）δ：8.03（2H，dd，J=5.5，3.5 Hz，H-3，4），7.54（2H，dd，J =5.5，3.5 Hz，H-2，5）；¹3C-NMR（CD₃OD，125 MHz）δ：172.4（C-7，8），135.2（C-1，6），132.4（C-2，5），132.0（C-3，4）。以上数据与文献[5]对照，判定该化合物为邻苯二甲酸。

化合物3 棕色固体；ESI-MS m/z 279 [M+H]⁺；¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）δ：7.73（2H，dd，J=5.7，3.3 Hz，H-2，5），7.62（2H，dd，J =5.7，3.3 Hz，H-3，4），4.07（4H，d，J=6.6 Hz，H-1′，1″），2.03（2H，m，H-2′，2″），1.00（12H，d，J =6.8 Hz，H-3′，3″，4′，4″）；¹3C-NMR（CD₃OD，125 MHz）δ：169.3（C-7，8），133.6（C-1，6），132.4（C-3，4），129.9（C-2，5），72.9（C-1′，1″），29.0（C-2′，2″），19.5（C-3′，3″，4′，4″）。以上数据与文献[6]对照，判定此化合物为邻苯二甲酸二异丁酯。

化合物4 白色固体；ESI-MS m/z 313[M-H]^-；¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）δ：7.56（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），7.15（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），7.07（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），7.03（1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6），6.79（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.71（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），6.31（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），4.29（2H，t，J=7.1 Hz，H-8′），3.87（3H，s，OCH₃），2.87（2H，t，J=7.1 Hz，H-7′）；¹3C-NMR（CD₃OD，125 MHz）δ：169.2（C-9），157.1（C-4′），150.7（C-4），149.4（C-3），146.8（C-7），130.9（C-2′，6′），130.1（C-1′），127.7（C-1），124.2（C-6），116.5（C-8），116.3（C-3′，5′），115.5（C-5），111.6（C-2），66.5（C-8′），56.4（OCH₃），35.4（C-7′）。以上数据与文献[7]对照，判定此化合物为阿魏酸对羟基苯乙醇酯。

化合物5 白色针状晶体（CH₃OH）；ESI-MS m/z 193[M-H]^-；¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）δ：7.55（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），7.12（1H，d，J=1.9 Hz，H-2），7.01（1H，dd，J =1.9，8.2 Hz，H-6），6.76（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.27（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），3.84（3H，s，OCH₃）；¹3C-NMR（CD₃OD，125 MHz），δ：171.0（C-9），150.4（C-3），149.3（C-4），146.9（C-7），127.7（C-1），124.0（C-6），116.4（C-8），115.6（C-5），111.6（C-2），56.4（OCH₃）。以上数据与文献[8]对照，判定此化合物为阿魏酸。

化合物6 浅粉色油状物；ESI-MS m/z 375[M+H+H₂O]⁺；¹H-NMR（CD₃OD，500 MHz）δ：7.62（1H，d，J=15.9 Hz，H-7），7.15（1H，s，H-2′），7.05（1H，d，J=8.1 Hz，H-6），7.00（1H，d，J=0.8 Hz，H-2），6.86（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.74（1H，dd，J=8.2，4.6 Hz，H-6′），6.70（1H，d，J=8.2 Hz，H-5′），6.60（1H，d，J=15.9 Hz，H-7′），6.36（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），6.20（1H，dd，J=9.2，6.6 Hz，H-8′），4.78（2H，d，J=6.5 Hz，H-9′），3.85（3H，s，OCH₃），3.83（3H，s，OCH₃）；¹3C-NMR（CD₃OD，125 MHz）δ：169.1（C-9），150.6（C-3），149.3（C-4），149.1（C-4′），147.9（C-3′），146.9（C-7），135.6（C-1），129.9（C-6），127.7（C-6′），124.1（C-1′），121.6（C-5），121.3（C-5′），116.4（C-7′），116.2（C-8），115.3（C-8′），111.7（C-2），110.5（C-2′），66.4（C-9′），56.4（OCH₃），56.3（OCH₃）。以上数据与文献[9]对照，判定此化合物为阿魏酸松柏酯。endprint

[参考文献]

[1] 冯学花， 梁肖蕾. 当归化学成分与药理作用的研讨进展[J]. 广州化工， 2012（22）： 16.

[2] 李曦， 张丽宏， 王晓晓， 等. 当归化学成分及药理作用研讨进展[J]. 中药材， 2013（6）： 1023.

[3] 张翠萍， 李行诺， 陈鸳谊， 等. 反相高效制备液相色谱法制备洋川芎内酯内酯H和I[J]. 浙江工业大学学报， 2011（4）： 386.

[4] Huang J， Lu X Q， Zhang C，et al. Anti-inflammatory ligustilides from Ligusticum chuanxiong Hort [J]. Fitoterapia， 2013， 91： 21.

[5] 吕洁丽， 段金廒， 唐于平， 等. 当归中新神经酰胺及有机酸的结构判定[C].南京：全国第8届天然药物资源学术研讨会，2008.

[6] 侯志帆， 梁永红， 何礼标， 等. 灵芝双向固体发酵雷公藤后菌质化学成分改变开始研讨[J]. 中草药， 2012（2）： 234

[7] 周凯岚， 毋冰， 庄玉磊， 等. 新鲜旱芹的化学成分研讨[J]. 我国中药杂志， 2009（12）： 1512

[8] Parchayasittikul S， Suphapong S， Worachartcheewan A， et al. Bioactive metabolites from Spilanthes acmella Murr [J]. Molecules， 2009， 14（2）： 850.

[9] Lu X H， Zhang J J， Liang H， et al. Chemical constituents of Angelica sinensis[J]. J Chin Pharm Sci， 2004， 13（1）：1.

A new phthalide from Angelicae Sinensis Radix

NIU Yan， WANG Shu-fang

（Pharmaceutical Informatics Institute， Zhejiang University， Hangzhou 310058， China）

[Abstract] Angelicae Sinensis Radix， dried roots of Angelicae sinensis， is a well-known traditional Chinese medicine. Six compounds were isolated and purified by silica gel and preparative HPLC. According to physicochemical properties and spectral data， the compounds were identified as senkyunolide H-7-acetate（1）， o-phthalic acid（2）， diisobutyl phthalate（3）， p-hydroxyphenylethanol ferulate（4）， ferulic acid（5） and coniferylferulate（6）. Compound 1 was a new one.

[Key words] Angelicae Sinensis Radix； phthalide； senkyunolide H-7-acetate

doi：10.4268/cjcmm20140116

[责任编辑 孔晶晶]endprint