红细胞低是什么原因 高浓度槲皮素对G6PD缺少者体外红细胞的影响

董金涛+++++陈丽++++梁丽红

[摘要] 意图 研讨高浓度槲皮素对G6PD缺少者体外红细胞的影响。 办法 选取G6PD活性正常、缺少的查验者各50例，收集外周血并与槲皮素孵育，测定红细胞的GSH、MetHb，并对红细胞的形状学改动进行查询，查询槲皮素对G6PD活性缺少者红细胞影响。 成果 槲皮素对G6PD缺少者红细胞具有显着的氧化效果，GSH呈下降趋势，而MetHb则显着上升（P<0.05），高浓度组MetHb为（5.70±2.03）%显着高于中、低浓度组（3.51±1.67）%、（1.31±0.68）%，差异有统计学含义（P<0.05）；缺失组与正常组遭到α-萘酚的影响存在显着差异，且两种孵育系统中的体现存在不同。 定论 槲皮素对G6PD缺少者红细胞有必定的氧化效果，因而在触及含有氧化性黄酮类化合物病制剂运用时应慎重。

[关键词] 高浓度槲皮素；G6PD缺少；红细胞

[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2015）02-0017-03

G6PD缺少者指酶活性因X染色体中G6PD基因改动而呈现不同程度的遗传性疾病，首要体现为溶血性贫血与新生儿黄疸，氧化性药物等很多要素均或许为其诱因[1]，黄酮类化合物一般有抗氧化活性，可放置活性自由基对机体构成危害，但运用不当仍或许导致患者呈现不同程度的活性自由基危害及细胞凋亡[2]。本次研讨针对高浓度槲皮素对G6PD缺少者红细胞的影响进行研讨，现报导如下。

1 材料与办法

1.1 一般材料

本研讨当选的100例受检者均为男性，在2010年10月～2014年3月在我院承受招募，年纪18～60岁，均匀（30.54±7.46）岁，依据G6PD活性分为G6PD活性正常组与G6PD缺少组，两组均为50例，正常组活性≥6.70/gHb，缺少组<6.70/gHb，两组年纪等基线材料差异无统计学含义（P>0.05），具有可比性。

1.2 归入规范

①男性；②血惯例、肝肾功能及体格查看正常；③无抽烟、嗜酒等不良嗜好；④4个月内未发作感染性疾病或溶血疾病；⑤两周内未服用药物；⑥无其他血液系统疾病；⑦对实验知情并自愿合作完结实验。一切患者行血惯例、肝肾功能查看，抽取外周静脉血20 mL，一起测定G6PD活性与体外活性孵育实验，上述查看及实验均在采纳后12 h内完结。研讨方案报医院道德委员会批阅经过。

1.3 仪器及药物

仪器包括全自动生化剖析仪、紫外可见分光光度计、高速冷冻离心机、水浴恒温振动器、全自动血细胞剖析仪。药物于中检所收购槲皮素与α-萘酚，运用二甲基亚砜将槲皮素装备为1、5、100 mol·L-1浓度的储藏液，α-萘酚运用二甲基亚砜装备为0.4 mg·mL-1储藏液。运用5 mmol·L-1PBS（5 mmol·L-1葡萄糖，140 mmol·L-1氯化钠，pH7.4稀释）对储藏液进行稀释处理，浓度为50%。

1.4 办法

1.4.1 G6PD活性测定 运用7170A全自动生化剖析仪对G6PD活性进行测定（接连监测速率法）。经过离心机将EDTA-K2抗凝血5 min离心处理，离心参数为4 000 r/min，防止血浆层搅扰汲取20 μL压积红细胞，并将其放入1mL溶解液中溶解，待1～2 min红细胞彻底溶解后进行测定。参数设定：1、2试剂别离为220 μL、25 μL；实验温度37°C；主波长及副波长别离为340 nm、660 nm；反响时间10min；设置209084为核算因数。以U/L表明成果，后以全自动血细胞剖析仪对Hb进行测定，进样量200 μL取EDTA-K2抗凝血2 mL，终究G6PD活性=G6PD（U/L）/Hb（g/L），并以U/gHb表明成果。

1.4.2 红细胞孵育 离心全血后别离血浆与白细胞层，压积红用4℃等渗PBS洗刷，洗刷三次后再次将40%体积悬浮于PBS中，制备40%红细胞悬液，参加懈皮素，浓度控制在50、250、500 μmol·L-1三个梯度。别离对应低、中、高组，别的建立α-萘酚组（0.02 mg·mL-1）、DMSO组（5%）和PBS组，在37℃水浴中放置孵育管，并振动孵育2 h。剩余的全血和药物进行孵育，相关设置同上。

1.4.3 GSH测定 还原性谷胱甘肽用比色法测定，将孵育完结后的血样离心处理（10 min，2000 r），将30 μL红细胞放置在720 μL蒸馏水中制备溶血液。将300 μL溶血液与1.2 mL GSH试剂混匀后高速离心，后抽取上清液1 mL进行显色反响，与420 nm处对吸光度进行测定，别的对规范管吸光度和空白管吸光度进行测定，终究核算处GSH含量，公式为GSH=测定管吸光度-空白管吸光度）/（规范管吸光度-空白管吸光度）×20×307×125/104。

1.4.4 MetHb检测 MetHb即高铁血红蛋白，其含量结合630 nm处吸光度的差值，查询其和Hb转化为MetHb的比值，用蒸馏水将上述制备溶血液300 μL用闭稀释为2.55 mL并混匀，将蒸馏水作为空白，在630 nm处测定吸光度A1；参加50 μL氰化钾溶液，于上述相同波长条件下测定A2。后抽取100 μL溶血液蒸馏水稀释至2.5 mL，将50 mL高铁氰化钠参加，同在630 nm处测定吸光度A3，另参加50 μL测定吸光度A4。运用（A1-A2）/（A3-A4）×100%公式将（MetHb）%核算出来。

1.5 统计学办法

运用SPSS13.0统计学软件进行数据剖析。两组受试者间的比较选用Students t-test。两组受试者各药物组与相应对照组的比较别离选用随机区组的方差剖析，并进行两两之间的LSD查验。P<0.05为差异有统计学含义。

2 成果

2.1 40%红细胞悬液G6PD缺少者GSH及MetHb测定

槲皮素对G6PD缺少者红细胞具有显着的氧化效果，GSH呈下降趋势，而MetHb则显着上升（P<0.05），见表1。

表1 40%红细胞悬液G6PD缺少者GSH及MetHb测定（x±s）

注：与低浓度比较，t1=4.925，t2=12.201，t3=4.925，t4=16.660，*P<0.05；与中浓度比较t1=8.331，#P<0.05

2.2 α-萘酚与DMSO对GSH及MetHb的影响剖析

缺失组与正常组遭到的α-萘酚影响存在显着差异，两组孵育系统体现差异显着，见表2。

3 评论

G6PD缺少者因为红细胞中还原性谷胱甘肽对氧化性物质有对立效果，使得血红蛋白、膜脂质遭到影响，氧化后变为高铁血红蛋白，促进交联细胞及Heinz构成，使形状结构呈现显着改动，终究或许导致红细胞破溶，另或许导致经内皮网状系统铲除[3]。D6PD缺少者红细胞氧化性危害可不断累积，因而有必要防止下降红细胞GSH进步氧化性压力的搅扰[4]。

红细胞危害程度受氧化物质危害的影响遭到红细胞压积的影响，当红细胞压积较小时，氧化危害程度则越高。一般情况下成年男性的红细胞压积值约为40%～50%，因而挑选40%红细胞悬液孵育系统对药物影响红细胞氧化效果的查询更为有利[5]。抗氧化物质、脂质、蛋白等物质均处于血浆中，全血中红细胞氧化程度细微，其检测客观性较高，可精确反映出生理情况[6]。

α-萘酚或许引发患者发作溶血性贫血，使GSH水平下降，另可进步MetHb水平上升。槲皮素氧化效果较强，在中浓度下即导致可构成较大的氧化性危害，一起其能够使全血中G6PD缺少者红细胞Hb发作氧化的物质[7]。

有研讨显现，包括槲皮素在内的很多黄酮类化合物对正常者红细胞及干细胞均有必定的氧化效果[8，9]，除懈皮素外的黄酮类化合物大多需和过氧化物酶/H202发作反响以参加这一进程，与黄酮类化合物催化氧化机制契合，但一起无法对其非催化氧化效果做出解说[10]。有研讨显现[11，12]，懈皮素脂性大，可直接氧化Hb，芦丁具有较高的亲水性，较难透过细胞膜直接氧化Hb，所以不会对G6PD缺少者、正常者的MetHb和红细胞GSH发生显着影响。

本次研讨对不同浓度槲皮素对G6PD缺少者红细胞的氧化效果进行研讨，而其氧化机制还需深入研讨，能够断定的是槲皮素会进步缺少者的氧化性压力，然后发生氧化性危害。因而G6PD患者应慎重运用，防止长期运用高浓度的槲皮素，尤其是新生儿、儿童及感染或遗传性溶血性疾病等患者应防止运用。

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（收稿日期：2014-09-23）