超高效液相色谱质谱 高效液相色谱—串联质谱法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量

李铭

[摘要] 意图 树立高效液相色谱-串联质谱法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的办法。 办法 色谱条件选用Agilent SB-C18柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm），以乙腈-0.2%冰乙酸（70︰30）为活动相，流速为0.3 ml/min。质谱检测选用正离子电喷雾离子源（ESI+），在多反响监测形式（MRM）下检测，监测离子（m/z）别离为：144/58、144/84。 成果 盐酸水苏碱浓度在0.2～10.0 μg/ml规模内与峰面积呈杰出的线性关系（r=0.9992），均匀回收率为102.6%，RSD为1.5%（n=6）。 定论 该办法快速简洁、专特点强、成果精确，可用于益母草颗粒的质量操控。

[关键词] 益母草颗粒；盐酸水苏碱；高效液相色谱-串联质谱法

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）01（b）-0008-03

Content of stachydrine hydrochloride from Motherwort granule determined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

LI Ming

Institute for Food and Drug Control of Beihai in the Guangxi Zhuang Autonomous Region，Beihai 536000，China

[Abstract] Objective To establish a method of high performance liquid chromatography （HPLC）-tandem mass spectrometry determining the content of stachydrine hydrochloride from Motherwort granule. Methods The chromatographic conditions were Agilent SB-C18 column （50 mm×2.1 mm，1.8 μm），acetonitrile to 0.2% glacial acetic acid （70︰30） as the mobile phase，and a flow rate of 0.3 ml/min.Positive ion electrospray ionization（ESI+） was applied for mass spectrometric detection under multiple reaction monitoring（MRM） mode.The monitored ions （m/z） was 144/58，144/84 respectively. Results The concentration of stachydrine hydrochloride being within 0.2 μg/ml to 10.0 μg/ml had a good linear relationship with the peak area.The r value was 0.9992，and the average recovery was 102.6% and the value of RSD was 1.5%（n=6）. Conclusion The method is fast，simple，specific，and accurate in outcome，which can be used for quality control of Motherwort granule.

[Key words] Motherwort granule；Stachydrine hydrochloride；High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

益母草颗粒是由益母草水提取物为首要原料加蔗糖、糊精等辅料经恰当加工而成的妇科常用中成药，具有活血调经止痛等功能，临床上用于医治经闭、痛经、产后瘀血腹痛及产后恶露不停、经量少、淋漓不净、产后出血时刻过长、产后子宫复古不全等。益母草中的首要活性成分为盐酸水苏碱。益母草颗粒为《我国药典》2010年版一部收载种类[1]，其对益母草中的盐酸水苏碱含量测定选用薄层色谱扫描。该办法影响要素多，数据重现性差。部分文献[2-20]选用高效液相色谱法，选用紫外检测器[2-14]、蒸发光检测器[15-19]、示差折光检测器[20]测定益母草制剂中盐酸水苏碱的含量。其大多数运用较特别的色谱柱，如氨基色谱柱、磺酸基阳离子交流色谱柱、丙烯酰胺色谱柱，且样品提取进程杂乱，操作不简洁。本文选用高效液相色谱-串联质谱法，运用质谱较高的挑选性和专一性，只用一般的C18反相色谱柱，只需简略的超声提取即能完成对益母草颗粒中盐酸水苏碱含量的测定，而该办法国内文献未被报导过。测定成果标明，该办法操作简洁、专特点强、灵敏度高、成果精确牢靠，可用于该制剂的质量操控。

1 仪器与试剂

美国Agilent 1290高效液相色谱仪，Agilent 6460三重四极杆串联质谱；AX205DU电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；SK250超声波清洗器（上海科导仪器有限公司，250 W，35 kHz）。

盐酸水苏碱对照品（我国食品药品检定研究所，含量：99.0%，批号：110712-201010）供含量测定用；益母草颗粒（A厂：批号130304；B厂：批号140402；C厂：批号130402），为市售品；乙腈为色谱纯，水为市售娃哈哈纯净水，冰乙酸为优级纯，其他检测用试剂均为剖析纯。

2 办法与成果

2.1 色谱及质谱条件

2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent SB-C18柱（50 mm×2.1 mm）；活动相为乙腈-0.2%冰乙酸（70︰30）；流速为0.3 ml/min；柱温为30℃；进样量为5 μl。

2.1.2 质谱条件 离子源为大气压电喷雾离子源（ESI源），挑选扫描办法为正离子，选用全扫描、挑选离子扫描及二级全扫描；雾化气压力：30 Psi（1 Psi=6890 Pa），枯燥气温度：300℃，辅佐气（N2）流速：8.0 L/min，离子源Vcap毛细管电压：4000 V，含量测定监测办法为多反响监测形式（MRM），盐酸水苏碱定性离子质荷比（m/z）144/84，定量离子质荷比144/58；定性和定量离子对应的磕碰能量压别离为22、26 V，碎裂电压均为128 V。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精细称取盐酸水苏碱对照品12.55 mg，置25 ml量瓶中，加70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.497 mg/ml对照品贮备溶液。精细量取对照品贮备液1 ml，置25 ml量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为19.9 μg/ml的对照品运用溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5包颗粒内容物，研细混匀，称取约5 g分量，精细称定，置50 ml量瓶中，加70%乙醇约40 ml，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）20 min，取出放冷至室温，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀、过滤，精细量取续滤液2 ml置100 ml量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，摇匀，经微孔滤膜（0.45 μm）过滤，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按药品规范中的处方份额和制法制备不含益母草的阴性样品，照供试品溶液的制备办法操作制备阴性对照溶液。

2.3 专特点调查试验

精细量取上述对照品运用溶液，供试品溶液，阴性对照溶液各5 μl注入高效液相色谱-质谱联用仪，按上述色谱及质谱条件下测定，记载色谱图，成果盐酸水苏碱的保存时刻约为3.5 min，溶液内的其他杂质不搅扰样品中的盐酸水苏碱别离测定，阴性样品在盐酸水苏碱色谱峰相应的保存时刻处未见搅扰峰呈现，标明办法的专特点杰出（图1）。

2.4 线性关系调查试验

精细量取上述对照品运用溶液0.1、0.5、1、2、5 ml别离置10 ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，即得一系列浓度的规范曲线对照品液。取每个浓度的规范曲线对照品液各5 μl别离注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，记载峰面积，进行线性调查。以浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得回归方程Y=31.96X+3.94×103（r=0.9992）。成果标明，盐酸水苏碱在0.2～10.0 μg/ml的浓度规模内有杰出的线性关系。

2.5 重复性试验

取同一批号样品（批号：130304）共6份，按供试品溶液的制备办法平行制造6份供试品溶液，同法测定，测得均匀含量为6.0265 mg/g，RSD为1.67%，标明办法有较好的重复性。

2.6 精细度试验

取盐酸水苏碱对照品运用溶液5 μl，注入高效液相色谱仪，接连进样5次，成果峰面积的RSD为0.77%，标明剖析办法精细度杰出。

2.7 安稳性试验

精细汲取同一份供试品溶液5 μl，别离在0、2、4、6、8、10、12、16、20 h按上述色谱条件下进行测定，成果盐酸水苏碱峰面积RSD为1.1%，标明在20 h内供试品溶液中盐酸水苏碱峰面积无明显变化，供试品溶液在20 h内安稳。

2.8 加样回收率试验

取同一批号（批号：130304）的已知含量样品5包，取颗粒研细混匀，称取6份约2.5 g细粉，精细称定，别离置50 ml量瓶中，别离精细参加盐酸水苏碱对照品适量，别离加70%乙醇约40 ml，超声处理20 min，取出放冷，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀、过滤，别离取续滤液2.00 ml，用70%乙醇定容至100 ml量瓶，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为回收率测定的供试品溶液。再按上述色谱及质谱条件下进样，测定盐酸水苏碱峰面积，按规范曲线测得含量，核算加样回收率。成果均匀回收率为102.6%，RSD为1.5%（表1）。

表1 加样回收率试验测定成果（n=6）

2.9 样品含量测定

取不同生产厂家样品3批，按上述供试品溶液的制备办法制造供试品溶液，别离注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记载峰面积，代入线性方程核算含量。3个厂家3个批号样品含量测定成果见表2。

表2 样品含量测定成果（n=3）

3 评论

3.1 提取时刻的挑选

在供试品溶液的制备上，本试验经过对不同超声的提取时刻（10、20、30、40 min）进行调查，成果显现，超声提取20 min已将样品中的盐酸水苏碱提取彻底。

3.2 活动相份额的挑选

在活动相的挑选上，活动相中乙腈与0.2%冰乙酸的份额经过屡次配比试验，当乙腈︰0.2%冰乙酸=70︰30时样品中的其他成分对盐酸水苏碱的测定无搅扰，且盐酸水苏碱的出峰时刻恰当，峰形、理论塔板数均较抱负，故选用该份额进行测定。

3.3 质谱条件的挑选

在对质谱条件的优化调查中，为使盐酸水苏碱的各子离子峰信号到达最强，以正、负离子形式别离进行检测，进行二级质谱扫描并经过优化裂解电压以及磕碰能压，经屡次试验到达最佳的质谱条件。

3.4 本试验办法的长处

益母草颗粒的原质量规范中的含量测定选用薄层色谱扫描法测定，其处理较为繁琐，测定时刻长，数据重现性差，而高效液相色谱法，色谱柱挑选要求条件高，样品提取进程杂乱，部分办法选用检测器灵敏度低。本文选用高效液相色谱-串联质谱法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量，具有较高的挑选性和专一性，灵敏度高，色谱柱挑选较一般常用，操作简洁、重复性好。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：我国医药科技出版社，2010：1025.

[2] 李研研，刘晓琰，陆国红，等.HPLC法测定肾八味胶囊中盐酸水苏碱含量[J].我国药师，2008，11（6）：624-625.

[3] 张韵，黄瑞红，何桂区.HPLC法测定安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量[J].广东药学院学报，2008，24（1）：16-17.

[4] 李政海，苏作林，廖展苇，等.HPLC法测定益母草颗粒（无蔗糖型）中盐酸水苏碱的含量[J].我国医药导报，2011， 8（26）：70-72.

[5] 郑倩，雪艳，李晓敏.HPLC法测定坤宁颗粒中盐酸水苏碱的含量[J].我国药事，2010，24（4）：392-393.

[6] 严优芍，李卫民.HPLC法测定益母草涣散片中盐酸水苏碱的含量[J].广东药学院学报，2006，22（6）：604-606.

[7] 余琪，章曙丹.益母草片中盐酸水苏碱的HPLC测定[J].我国医药工业杂志，2006，37（1）：34-35.

[8] 仇其原，邓晓文，吴旸.HPLC法测定益母草膏中盐酸水苏碱的含量[J].齐鲁医药，2010，29（4）：209-210.

[9] 包小红，周娟，伍丕娥.HPLC法测定4种益母草制剂中盐酸水苏碱及其规范办法点评[J].中成药，2012，34（9）：1825-1828.

[10] 唐哲，刘莉，张玮.RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中的盐酸水苏碱的含量[J].我国中医药信息杂志，2008， 15（8）：51-52.

[11] 施法，段瑞，马晓璐.HPLC法测定益母草胶囊中的盐酸水苏碱的含量[J].我国药品规范，2008，9（4）：307-308.

[12] 张玉萌，项菲菲.益母草饮片中的盐酸水苏、盐酸益母草碱含量测定[J].辽宁中医药大学学报，2013，15（2）：73-74.

[13] 邹洪君，王宇杰，王志海.高效液相色谱法测定益母草胶囊中的盐酸水苏碱的含量[J].辽宁中医杂志，2008， 35（7）：1064-1065.

[14] 吴海林，甄录旭，方宗华，等.HPLC法测定益母草中的盐酸水苏碱的含量[J].安徽医药，2008，12（7）：597-598.

[15] 黄蘅，陈学松，廖强.HPLC-ELSD法测定益母草中的盐酸水苏碱[J].我国药师，2009，12（12）：1749-1750.

[16] 王晓燕，王舒.HPLC法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱的含量[J].有用医药杂志，2012，29（6）：523-524.

[17] 莫怀初.使用HPLC法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱的含量[J].今世医药论丛，2014，12（1）：197-198.

[18] 林冬杰，张会球.HPLC-ELSD法测定益母草流浸膏中的盐酸水苏碱的含量[J].亚太传统医药，2009，5（2）：45-46.

[19] 徐瑞琼.HPLC-ELSD法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱的含量[J].我国现代使用药学，2013，30（2）：189-190.

[20] 黄强增.HPLC-RID法测定益母草颗粒中的盐酸水苏碱含量[J].海峡药学，2012，24（11）：63-65.

（收稿日期：2015-06-09 本文修改：王红双）