丙型肝炎病毒感染 抗HCV筛查血液透析患者丙型肝炎病毒感染的危险
章武战等
[摘要] 意图 研讨单测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）的形式与血液透析患者中丙型肝炎病毒（HCV）漏检率的联系，评论丙型肝炎病毒中心抗原（HCV-cAg）检测作为下降血液透析患者丙型肝炎病毒感染危险的可行性。 办法 经ELISA法检测抗-HCV均为阴性的181例血液透析患者作为研讨目标，别离于90 d、180 d一起ELISA法检测抗-HCV和HCV-cAg，其阳性标本选用荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）进行HCV-RNA承认。 成果 181例血液透析组中HCV漏检9例（漏检率4.97%），外科手术组HCV漏检1例（漏检率0.55%），差异有统计学含义（P<0.05）；11例HCV中心抗原阳性标本承认10例HCV-RNA阳性，阳性契合率90.9%（10/11）。随访目标第90天、180天，联合检测（抗-HCV和 HCV-cAg）阳性率别离为5.52%和6.08%，抗原抗体一起呈现阳性的比率别离为30%和36%。 定论 联合HCV-cAg检测有益于进步血液透析患者的阳性检出率，下降透析进程中患者之间丙型肝炎病毒穿插感染的危险。
[关键词] 丙型肝炎；血液透析；病毒抗体；中心抗原
[中图分类号] R459.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）09-0100-04
Risk of anti HCV screening for hepatitis C virus infection in hemodialysis patients
ZHANG Wuzhan1 CHEN Junhua1 LIU Shenghua2 CHEN Haijun3
1.Clinical Laboratory，Wenrong Hospital of Jinhua City in Zhejiang Province， Jinhua 321000，China； 2.Department of Nephrology，Wenrong Hospital of Jinhua City in Zhejiang Province，Jinhua 321000，China； 3.Department of Infection Diseases，the Central Hospital of Jinhua City in Zhejiang Province， Jinhua 321000，China
[Abstract] Objective To study the correlation between patterns of single test of hepatitis C virus antibody（anti -HCV） and miss rate of hepatitis C virus（HCV）in hemodialysis patients，to explore the core antigen of hepatitis C virus （HCV-cAg） detection as the feasibility to reduce the risk of hepatitis C virus infection in hemodialysis patients. Methods Selected 181 hemodialysis patients as the research subjects，whose anti-HCV tests were shown as negative through the method of ELISA. In 90 days and 180 days，ELISA method was used to detect the anti-HCV and HCV-cAg. Positive samples by fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）were detected by HCV-RNA. Results HCV had 9 cases missed detection in 181 hemodialysis group（miss rate 4.97%）； Surgical operation group was 1 case （miss rate 0.55%）.The difference of the two groups by χ2 test was significant（P<0.05）； 11 cases of HCV core antigen positive samples were confirmed to 10 cases of HCV-RNA positive，the positive coincidence rate was 90.9%（10/11）. Subjects were followed up for the 90th day and the 180th day，the combined detection of anti-HCV and HCV-cAg positive rates were 5.52% and 6.08%. The antigen and the antibody appeared at the same time the positive rates were 30% and 36%. Conclusion Combined detection of HCV-cAg is helpful to improve the positive rate of hemodialysis patients，and reduce the risk of hepatitis C virus infection.
[Key words] Hepatitis C virus； Hemodialysis； Virus antibody； Core antigen
血液透析作为现在医治终晚期肾脏疾病的一种重要手法，其患者经血液体系的开放性医治，罹患感染性疾病的危险远高于其他人群。病毒性肝炎是保持性血液透析的首要并发症之一，而因为短少疫苗，患者免疫力低下且需求输血医治，血液透析患者是感染丙型肝炎病毒（HCV）的高危易感人群[1]。近年来不断加强的输血前感染检测以及对供血者实施血清抗-HCV抗体的挑选，输血引起的HCV感染显着削减。透析患者之间的医院内感染或许会成为首要途径，这或许与患者免疫功用低下、透析单位管道冲刷不彻底、透析器及管路复用等要素有关。因而削减医院穿插感染，首要应前期确诊。保持血液透析患者每半年进行试验室感染性目标检测，实施阴阳分区分机，现在是血透前的惯例程序，但关于丙型肝炎感染目标的检测，大多试验室往往是检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV），阳性再测HCV-RNA的形式。本文咱们对立-HCV阴性的患者血清从头再用ELASA办法检测丙型肝炎病毒中心抗原（HCV-cAg），最终检测HCV-RNA进行承认，以此评论单测HCV抗体形式是否存在漏检的危险以及应展开的操控措施。
1 目标与办法
1.1研讨目标
2013年5～9月来我院行血液透析的患者，经过透前惯例抗-HCV检测。将抗-HCV阴性的血清标本置-30℃保存，共181例，再别离于透析期90 d、180 d盯梢随访抽取血标本，相同条件下保存。年纪18～82岁，其中男98例，女83例；对照组选取一起段、同数量的抗-HCV阴性的外科术前患者181例，标本在相同条件下保存。年纪20～79岁，其中男101例，女80例，两组患者的性别、年纪比较，差异均无统计学含义（P>0.05），见表1。
表1 两组患者的性别、年纪比较
1.2 HCV-cAg检测
选用山东莱博生物科技有限公司的丙型肝炎病毒中心抗原检测试剂盒检测HCV中心抗原。试剂批号：201309001，注册证号：国食药监械（准）字2011第3401278，严厉按说明书要求操作。
1.3 抗-HCV检测
选用厦门英科新创科技有限公司的丙型肝炎病毒抗体确诊试剂盒检测抗-HCV抗体。试剂批号：2013015804，注册证号：国药准字S10950055，严厉按说明书要求操作。
1.4 HCV-RNA检测
HCV中心抗原阳性的标本再选用荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）进行承认。试剂批号：201301063，注册证号：国食药监械（准）字2013第3400644，严厉按PCR技能操作流程。
1.5 统计学办法
一切材料选用SPSS 12.0软件进行剖析。研讨目标性别比较选用χ2查验，年纪契合正态分布以（x±s）标明，两组间年纪比较选用t查验。试验成果漏检率选用独立样本χ2查验的四格表校正法，两种办法阳性率改动比较选用Fisher精确概率法，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 两组抗-HCV抗体阴性查询目标中HCV-cAg检测成果及漏检率
见表2。362例抗-HCV阴性的患者中单测抗-HCV漏检率为2.76%（10/362），而HCV-cAg检测能捕获到漏检。
2.2 181例随访目标不一起期的抗-HCV及HCV-cAg检测成果及阳性率的改动
见表3。11例HCV中心抗原阳性标本承认10例HCV-RNA阳性，阳性契合率90.9%（10/11）。抗-HCV检测阳性率跟着透析时刻的延伸而升高，180 d后升高显着。与抗-HCV检测比较，HCV-cAg在前期检测优势显着。联合检测阳性率、双阳率也随透析进程在逐渐进步。
表2 两组抗-HCV抗体阴性查询目标中HCV承认成果及漏检率
表3 181例随访目标不一起期的抗-HCV及HCV-cAg检测成果及阳性率的改动
注：①两种办法阳性率比较，P=0.004
3 评论
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的一种重要的世界性流行症，首要经血液及血制品传达，也易发院内感染。丙型肝炎病毒缓慢感染可导致肝脏缓慢炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化乃至肝癌。1989年Michael Houghton等运用分子克隆技能发现了丙型肝炎病毒（HCV）。丙型肝炎病毒具有显着异源性和高度可变性，在同一患者不一起期以及同型各株间，乃至表现在别离克隆之间、基因序列之间都会呈现差异，这将导致编码产品发作改动，其抗原型发作改动[2]。HCV抗体检测所运用的HCV 基因重组抗原质量差异、不同的抗原片段包被份额以及非选择性的广谱抗IgG酶标抗体，会导致HCV抗体检测的灵敏度和特异性存在差异。因为医院发作丙型肝炎感染的胶葛常常发作，早检出和早防治刻不容缓，不断改进的HCV抗体检测以及中心抗原检测也是现在研讨的要点方向。
抗-HCV不是保护性抗体，是HCV感染的标志。现在HCV抗体检测仍是确诊丙型肝炎的首要血清学目标，但因感染后抗-HCV呈现较慢，在血清中呈现可推迟几个月才干被检测到，即所谓的窗口期，故前期确诊丙型肝炎感染有困难。在临床上，缓慢丙型肝炎的患者抗-HCV多为阳性，但在免疫抑制的患者，如HIV感染者、实体器官移植受者、低丙种球蛋白血症或许血液透析患者中往往会呈现抗-HCV阴性，导致漏诊发作。
展开HCV-cAg检测具有前期确诊的运用价值[3]，本试验检测选用基因重组表达的丙型肝炎病毒中心区抗原免疫制备的抗HCV-cAg抗体包被酶标板孔，以双抗体夹心酶联免疫法检测人血清中HCV中心抗原，酶标仪以临界值（CUT OFF）判别HCV抗原阳性。本文成果显现，362例抗-HCV阴性的患者中有10例RT-PCR承以为阳性，单测抗-HCV未检出率为2.76%，且血液透析组4.97%显着高于外科手术组0.55%，标明血液透析患者单测抗-HCV存在显着的HCV阳性漏检。尽管透析进程时刻的延伸，抗-HCV阳性检出例数也会逐渐添加，可是单测抗-HCV与HCV-cAg比较，181例随访目标中仍是呈现9例漏检，且在透析初期差异愈加显着，显现选用HCV-cAg的检测办法，其前期捕获才能显着高于单测抗-HCV办法。
PCR办法检测HCV-RNA灵敏度高，是反映体内丙型肝炎病毒活动的直接依据，因而可作为确诊丙型肝炎的“金标准”。人在感染HCV 1～2 周，其血清中就能检测到HCV-RNA，反映病毒的仿制与感染性，也是病毒血症的标志。但HCV-RNA检测对人员、技能、环境、仪器设备及本钱要求较高，无法取得全面展开。HCV-cAg是丙型肝炎病毒基因编码的结构蛋白之一，其氨基酸序列比较保存，使检测HCV-cAg相对安稳牢靠。有研讨标明其在血清中的滴度与HCV-RNA水平、动力学改动密切相关，能够作为病程发展或抗病毒医治的效果监测目标[4]。但本次11例HCV-cAg阳性成果中有1 例HCV-RNA 成果为阴性，显现两者并不是100%彻底相关，或许是HCV-cAg检测试剂还需求进一步完善，防止假阳性发作。
HCV-cAg作为丙型肝炎感染者前期标志物， 与HCV-RNA简直一起呈现。HCV-cAg检测能够补偿抗-HCV抗体检测的缺乏，显着进步HCV检出率，本文成果显现HCV-cAg具有前期检测含义且与RT-PCR的阳性契合率为90.9%。文献报导，HCV-cAg阳性样品中HCV-RNA 阳性率为85% 以上，两者之间密切相关[5-7]。HCV-cAg检测阳功能较HCV抗体检测提早14～68 d，均匀35.2 d[7，8]，能够削减因窗口期形成的漏检[9-14]。文献标明HCV-cAg检测有推行的可行性，有利于丙型肝炎的前期确诊，进步血液透析患者HCV的检出率，下降血液透析穿插感染的危险。血液透析患者单测抗-HCV存在较高的HCV阳性漏检危险，或许原因是：①抗-HCV试剂还不行灵敏；②血液透析患者免疫力低下或免疫受抑状况，抗体浓度较低乃至缺失，病程期内不易检测到抗-HCV抗体；③患者处于窗口期，HCV抗体发生有较显着的窗口期，均匀为70 d，抗-HCV 阴性并不能扫除带着HCV 或感染的或许。因而，在血液透析患者中不能只检测抗-HCV抗体，不然存在漏检的或许[15]。
保持血液透析患者中HCV感染率文献报导不尽相同，但遍及高于健康人群，且跟着透析次数的添加，感染率显着升高。本文已除掉初检抗-HCV阳性患者，将抗-HCV阴性患者作为研讨目标，从另一旁边面反映透析进程对HCV感染率的影响。本研讨显现透析时刻继续越长，HCV阳性率升高。任南等[16]报导不同透析继续时刻患者HCV感染率，大于3年的感染率是小于1年的24倍。可见血液透析前HCV精确检测之重要，显着能够下降医疗危险。
HCV漏检会涉及到医院性感染的职责问题，联合HCV-cAg检测就很有必要，会更有利于窗口期更长、免疫受抑的血液透析患者的挑选。并且展开HCV-cAg的ELISA检测，其操作与现在检测HCV 抗体相似。操作简洁，本钱相对较低，并且无特别设备要求，底层试验室均能展开，适宜遍及筛查。联合检测抗-HCV抗体和HCV-cAg可起到互补效果，进步阳性检出率[17]，比单测抗-HCV抗体更能下降这些危险。血液透析医院加强患者透析前的严厉筛查分级、做好根底卫生防护、严厉遵守感染操控措施、履行严厉的标准操作、展开针对医护人员和患者的教育计划、手部卫生、透析机的保护和消毒、医疗物品一次性运用和废弃物的办理等对下降血透患者丙型肝炎感染率也是非常重要的。
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（收稿日期：2014-11-25）